| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Dounce 氏玻璃匀浆器（B 型研杵）Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台管型透析膜（14000 MWCO）电导计 |
| 实验步骤 | 1) 按基本方案中步骤1〜8操作。 2) 在低盐缓冲液中重悬细胞核后（1/2体积pnv，见基本方案步骤8)，将细胞核悬液分成5等份。 3) 在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1/3体积高盐缓冲液：在第1份 中加KCl浓度最低（0.8 mol/L)的高盐缓冲液，其余各份中依次加入KCl浓度逐 渐增高（直到1. 6 mol/L)的高盐缓冲液。 4) 确定在离心管斜面上有提取出的细胞核，轻轻混合30 min。 5) 25000 g离心30 min,除掉核。 6) 将上清轻轻倒出，进行透析（见基本方案步骤12)，直到加KCl浓度最高的那份核悬液的电导率达到与透析液一致（100 mmol/L KCl)。提取物25000 g离心20 min。 7) 检测各份提取物的电导率并测定蛋白质浓度（见基本方案步骤13和14)。 8) 直接分析提取物或分装到试管中，在液氮中速冷后放入-80℃保存。 |
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