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Northern印迹和总RNA杂交实验——杂交和放射自显影

2019.4.04
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验材料

mRNA

试剂、试剂盒

甲酰胺SSPEDenhardt 试剂SDS

仪器、耗材

滤膜

实验步骤

1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。

在 42℃：

50% 甲酰胺

5x SSPE

2 x Denhardt 试剂

0.1% SDS

或者在 68℃：

6x SSC

2x Denhardt 试剂

0.1% SDS

2. 把已变性了的放射性标记探针直接加到预杂交液中。为了探测到低丰度的 mRNA，至少使用 0.1 μg 比活超过 2x108 cpm/μg 的探针。在合适的温度下继续温浴 16~24 小时。

3. 室温下在 1x SSC，0.1% SDS 中洗滤膜 20 分钟，接着在 68℃ 用 0.2x SSC，0.1%SDS 洗滤膜，每次 20 分钟，洗 3 次。

4. 通过使用增感屏，在 -70℃ 用滤膜对 X-射线胶片（Kodak XAR-2 或同类产品）曝光 24~48 小时来制得放射自显影图。

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