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本方法中酸的离解根重要,若温度过低、或酸度不够,醛基暴露不充分,染色会过浅;反之,酸解过分,能导致DNA完全解聚,而染色体的染色反应减弱。细胞中RNA对酸比较稳定,醛基难游离,不被着色,为DNA特异性染色的原因。
HClSchiff亚硫酸钠品红
棕色瓶
1. 单层盖片法培养细胞,Carnoy或醋酸/甲醇固定20 分钟;
2. 投入1 N HCl 1~2 分钟(室温);
3. 投入1 N HCl 8~10 分钟(60 ℃);
4. 投入Schiff剂中染色1~5 小时(10 ℃暗处);
5. 漂洗液洗2 次,每次2 分钟;
6. 蒸馏水漂洗2 次,每次3 分钟;
7. 脱水75 %→100 %酒精;
8. 透明二甲苯2 次,每次3 分钟;
9. 封片把盖片置于载物片上(细胞面向上),滴树胶少许,再加较大盖片覆盖;
10. 盖片上加微型重物加压,置数日,树胶干后观察。
镜下观察可见,细胞核染成粉红色至紫红色,胞质无色(为观察DNA,胞质可不必复染)。