(a)从培养瓶中吸出生长培养基弃之。
(b)PBSA润洗后弃去洗液。
(c)加人足量的胰蛋白酶/EDTA覆盖培养瓶底。
(d)在37℃孵育5〜10 min(在显微镜下观察细胞是否脱落)
(e)重悬细胞,置于15 ml离心管中,300g离心5min。
(f)用1ml生长培养基洗涤,转移至普通器皿或离心管中。
(g)用血细胞计数板对细胞进行计数。
(h)重复离心(620g,10min),弃去上清液。
(i)用分化培养基将其稀释到1×106个细胞/ml。
(j)按1 ml/管分装到新Eppendorf管中。
(k)300g离心5 min,上清保留不动。
(l)置于37℃孵箱。
(m)每2〜3天更换培养基(见下面的注解1)
(n)培养2〜3周软骨生成(见注解2) 展开 |