PI3K/Akt/mTOR信号通路_mTOR抑制剂作用法

HepG2细胞Hep3B细胞

阿霉素RAPA

培养箱荧光显微镜流式细胞仪二氧化碳细胞培养箱酶标仪盖玻片载玻片

一、细胞表达检测

1.  分别取对数生长期的HepG2和Hep3B细胞，以不同浓度的DOX单用或与RAPA（20 nmol/ml）联合应用培养48 h或24h。

2.  以MTT法测定药物对HepG2和Hep3B细胞的增殖抑制作用，以流式细胞技术检测二者的凋亡情况，以 Western blot法检测者P-p70S6K（T389）、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）的表达改变。

二、细胞表达结果

1.  0.156～2.5 mg/L浓度范围内，DOX能抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖，且呈浓度依赖性；DOX在0.625～10mg/L浓度范围内，Hep3B细胞的相对存活率显著大于HepG2细胞（P<0.01）。

2.  与DOX单用比较，DOX（0.156～2.5 mg/L）与RAPA联用显著降低了HepG2和 Hep3B细胞的存活率（P<0.01或P<0.05），DOX（0.156～10mg/L）与RAPA联用，Hep3B细胞存活率显著大于 HepG2细胞（P<0.01）。

3.  DOX（0.156～10 mg/L）单用或与RAPA联用24h均可诱导HepG2和Hep3B细胞凋亡发生，且 随DOX浓度增加，凋亡牢升高。

4.  与DOX单用比较，DOX（1.25～10 mg/L）与RAPA联用，HepG2细胞捌亡率较显著升高 （P<0.01或P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）与RAPA联用，Hep3B细胞凋亡率显著升高（分别P<0.05）。

5.  DOX（5.0～10mg/L）单用，HepG2细胞凋亡率显著大 于Hep3B细胞（分别P<0.05），DOX（2.5～10 mg/L）与RAPA联用，HepG2细胞凋亡率显著大于Hep3B细胞（分别P<0.01）。

6.  RAPA（20nmol/L）、DOX（2.5mg /L）以及二者联用均可导致HepG2或Hep3B细胞P-p70S6K（T389）、P-4E-BP1（S65）和pS6（S235/236）表达减 少，且以DOX与RAPA联用效应最为明显。

三、细胞表达结果分析

1.  DOX可抑制HepG2和Hep3B细胞生长增殖，促进细胞凋亡，下调PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度。

2.  DOX与 RAPA联合用药能显著抑制HepG2和Hep3B细胞的增殖，促进细胞凋亡，下调PI3K/Akt/mTOR信号通路的活化程度，并在一定浓度范围内表 现出协同效应。

3.  在一定浓度范围内，HepG2细胞对DOX单用或与RAPA联合用药的敏感性显著高于Hep3B细胞，可能与HCC细胞p53的表达 差异有关。