特殊细胞培养实验_球体细胞培养实验

细胞

Hanks培养液胰蛋白酶

吸管

1.  琼脂铺底的培养瓶

30 ml无菌培养瓶，每瓶中加5 ml 2 %琼脂培养基，冷却，形成平坦底层后备用；

2.  取生长状态良好已联接成片的细胞，用弯头吸管伸入瓶内，把细胞层纵横割划成若干小区后，倒出培养液；

3.  加入0.25 %的胰蛋白酶液，在倒置显微镜下边消化边观察，当细胞小区边缘微卷起后便立即终止消化，倒出消化液，用Hanks轻轻漂洗一次（不洗亦可），加入新培养液3~5 ml，用吸管把已松动的细胞片吸打下来；分装入1~3 个含2 %琼脂培养基底层的培养瓶中，置温箱继续培养，数日后便可生长成细胞球体；

4.  换液

培养1~2 日后，如需换液，微倾斜培养瓶，令培养液集于培养瓶底角，停片刻，待球体细胞下沉后，吸除部分培养液，再补充新培养液。

1.  消化细胞方法是影响细胞能否集聚成团，形成球的一个重要因素，如用0.25 %的胰蛋白酶加0.2 %的EDTA消化细胞，虽能把细胞消化成分散的细胞悬液，但接种在任何底物上都不易形成球体，可能与EDTA 作用有关。

2.  当细胞尚未连接成片时，消化后也容易形成分散的细胞悬液，同样难以形成球体；从而细胞片是形成球体生长的一个重要条件。

球体细胞也可和单层细胞混合培养，便于研究两种不同细胞的相互影响。方法是

1.  先做单层培养，待细胞长成单层细胞后，把2 %琼脂培养液注入瓶内，令其在单层细胞上面形成琼脂层。注意在加琼脂时，要使琼脂冷却到快要凝固前再注入瓶内，以避免过热损伤细胞。

2.  当琼脂脂固后，再把已准备好的另一种细胞球体培养液接种在上面，便形成琼脂层下为单层细胞，上层为球体细胞的混合培养。下层细胞生活在琼脂培养液中，既能从琼脂培养液中也能从上层培养液中获取营养；因琼脂的限制却不易与上层球体细胞相混或干扰，但相互却能发生影响，可借以研究细胞相互关系。