抗肽的抗血清制备及从多肽库筛选B细胞和T细胞抗原表位

基 本 方 案 使用双功能团试剂将合成肽偶联至载体蛋白

材 料

家兔

肽-载体的连接体（单 元 13. 1)

P B S , p H 7. 5

弗 氏 完 全 佐 剂（F C A ; Pierce Biotechnology)

弗氏不完全佐剂

1 . 收 集 血 样（如从耳动脉或耳静脉），每只家兔准备 2〜5m l 免 疫 前 的 血 清（单 元 1.2)。至少准备 2 只家兔，以防一只家兔死亡或者免疫接种失败。

2 . 将 0.7〜L O m g 的肽-载体的连接体溶于 I m l 的 P B S ， 并 加 入 Iml F C A 彻底混溶。每只 家 兔 免 疫 接 种 I m l 这 种 稳 定 的 乳 浊 液 ，在 皮 下 多 个 位 点 接 种 ，每 个 位 点 0.1〜
0•2 ml (单元 1. 2 ) 。

3.2〜6 周 后（或检测到免疫反应减弱时较理想；见基本方案 2)，准备一份新的乳浊制剂追加剂量，使用相同的连接体但添加的是弗氏不完全佐剂。如上所述在皮下多个位点接种。若免疫原的量有限，则使用初次免疫接种量的 1/4。

4 . 在加强免疫后 3 周取家兔血样，在 4 周后再次取血获取抗肽的血清。检测免疫反应(见基本方案 2)。

5 . 可选 ：若 5〜6 周后免疫反应依然较低，在 10〜1 2 周再次加强免疫一次。并在最后一次接种后 3〜4 周后再次取血。不要第三次加强免疫。

6 . 在免疫反应最强的时候在动物身体许可的范围内取尽可能多的血样。对有免疫反应的兔子在合适的时间取血，这取决于对抗血清质量的要求或已获得了足够多的抗血清 。将血清储存在一 70°C 。

7 . 可 选 ：通过免疫亲和层析法，将 抗 血 清 中 不 需 要 的 成 分（如抗载体的抗体）去掉以纯化抗肽的抗体。

基 本 方 案 2 用 间 接 ELISA 法检测抗多肽抗体滴度

这种检测方法能从长度大于 1 5 个氨基酸的肽中筛选出抗血清。对于较短的肽链，