酶与抗体的偶联实验2

2019.4.06

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酶与抗原特异性杭体偶联后，可通过ELISA或免疫印迹反应来检测抗原。辣恨过氧化物酶和碱性磷酸酶的偶联物可用于上述两种检测实验中，它们均可检测1~10 mg/ml 的抗原，而后一种检测方法则更为稳定。

实验材料	抗体
试剂、试剂盒	磷酸钠 HRPO 碳酸盐缓冲液过碘酸钠 SAS Tris EDTA BSA 甘油
仪器、耗材	透析膜离心机
实验步骤	1. 透析5 mg/ml 抗体溶液，除使用PBS之外，其方法与基本方案中的步骤1完全相同。透析完毕，将抗体溶液置于一个试管中，并测A₂₈₀处吸光度。用PBS将其稀释至3 mg/ml。 2. 往一个1. 5 ml 的微量离心管中加入3 mg/ml 的抗体溶液100 碱性磷酸酶90 μl。再加入5 μl 的25%戊二醛，温和地混匀，置于室温下备用. 3. 于0、5、10、15、30、60及120 min 时分别取出25 μl 小份反应液，分别置于独立的1.5 ml 微量离心管中（冰浴），各加125 μl PBS，然后各加1.1 ml Tris/卵清蛋白缓冲液。 4. 透析样品，方法同步骤1。用直接ELISA法检测样品中的碱性磷酸酶的活性，以确定最佳的交联时间。采用最佳交联时间重复步骤1~3。 5. 加入叠氮化钠至终浓度0.1%，于4℃避光可保存约1年，或加等体枳的甘油，于 - 20℃可保存约1年。展开

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