放射性同位素标记的抗原 抗体

显影液定影液

X—射线胶片全色胶片电泳仪电泳槽

一、材料
 

1.  放射性同位素标记的抗原或抗体
 

2.  X-射线胶片或全色胶片
 

3.  显影液与定影液
 

4.  其它同对流免疫电泳
 

二、操作方法
 

1.  按对流免疫电泳制备凝胶板并打孔。
 

2.  加样阴极端孔内加抗原,阳极端孔内加抗体。在加被检抗体样品时，迅速加入标记抗原(2 000~3 000 cpm)，并使之混合，勿使抗原吸收后再加标记抗原，以免由于标记原的滞面而形成假阳性。
 

3.  电泳电流2.6 cmx7.5 cm的小板用4 mA。
 

4.  电泳后，平板浸在3%HCl中漂洗8 h，换液2次。
 

5.  用流水漂洗过夜。
 

6.  干燥室温或鼓风机吹干。
 

7.  曝光在暗室将胶片切成与平板一样大小，然后将药面密接凝胶面，再在胶片上压一张玻板，用黑布包严，皮筋扎紧，曝光时间与所用同位素及保存期有关。181I，一周内5 h~10 h；1~2周内24 h；2~3周内48 h。125I，在2个月内10 h。
 

8.  冲洗全色胶片冲片方法,水洗、20℃显影10min、水洗、定影、水洗、凉干,观察结果。
 

三、结果判定
 

在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者，判为阳性。

1. 当标本为脂血症、陈旧血标本或由于α2-巨球蛋白可引起假阳性，它靠近阳极呈弧状。为排除这种假阳性可用参比电泳鉴别，即阳性对照孔与待检孔间距为0.2cm，在两孔中间相距0.4cm处打抗血清孔，加样后电泳，两沉淀线吻合为阳性，相交为阴性，其它试验条件与以上试验相同。

2. 电泳缓冲液的pH值、离子强度、电压和电泳时间对检测结果均有影响，应注意控制。

3.  电泳时间随孔间距的增大需适当延长。当两孔距离为1cm时，电泳时间为1.5——2h；孔间距为0.6cm时，电泳时间为1h。

4. 抗原与抗体浓度比例应适当，可通过稀释抗原适当调整，以免出现假阴性。

1. 结果判定：在抗原抗体孔之间形成一条清晰的黑色影像者，判为阳性。

2. 该方法简单快捷，敏感度比双相免疫扩散法高8——16倍。

3. 必须使用高特异性、高亲合力的诊断抗体，否则结果难以解释。

4. 必须选用有高电渗作用的琼脂作支撑介质。