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胰岛素测定实验——放射免疫测定

2019.4.07
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

放射免疫测定胰岛素可以用于：（1）以放射性同位素作为示踪物进行免疫标记检测技术；（2）用同位素标记的抗原和样品中待测的未标记抗原与固定量的特异性抗体竞争结合，或进行竞争性一致反应，以判定待测抗原含量。

实验方法原理胰岛素的分子量5700，由两条氨基酸肽链组成。A链有21个 氨基酸，B链有30个氨基酸。A-B链之间有两处二硫键相连。胰岛B细胞中储备胰岛素约200U，每天分泌约40U。空腹时，血浆胰岛素浓度是5～15μU/mL。进餐后血浆胰岛素水平可增加5～10倍。胰岛素的生物合成速度受血浆葡萄糖浓度的影响，当血糖浓度升高时，B细胞中胰岛素原含量增加，胰岛素合成加速。胰岛素是与C肽以相等分子分泌进入血液的。
实验材料

胰岛素标准品125 I－胰岛素

试剂、试剂盒

抗血清第二抗体PBS正常兔血清

仪器、耗材

计数仪试管加样器离心机

实验步骤


1.  按表进行。


2.  测定和计算反应完毕后，将各管于室温3 000 r/ min离心30min，仔细吸取上清液，收集于放射性废液贮存容器内。用－计数仪分别测量各管沉淀物（B）的放射性强度（cpm），以两管的cpm均值表示。再以第1，2管的cpm值为Bo，分别计算结合率（B%，即B/Bo×100%），用B%为纵坐标，不同浓度胰岛素标准品为横坐标，绘制标准曲线。然后根据待检管的B%，从标准曲线中即可查得胰岛素的相应含量。

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注意事项

临床上使用胰岛素治疗的病人，血清中存在胰岛素抗体，影响放射免疫方法测定血胰岛素水平，在这种情况下可通过测定血浆C肽水平，来了解内源性胰岛素分泌状态。

其他

1.空腹时正常值为5～15mU/L，胰岛素依赖型则低于正常的下限或测不出，非胰岛素依赖型在正常范围或高于正常人。
2.胰岛素释放试验：胰岛素依赖型无高峰出现，呈低平曲线；非胰岛素依赖型高峰较正常为低，或高峰延迟。 


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