实验方法原理 | TNF-α受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞,根据TNF-α与相应靶细胞结合后引起不同的生物学效应,建立了多种检测TNF-α生物学活性方法。某些肿瘤细胞膜表面的TNF-α受体与TNF-α结合后,可导致这些肿瘤细胞的死亡,可通过检测对肿瘤细胞的杀伤能力,来反映TNF-α的生物学活性。若这种肿瘤细胞先用3HTdR标记,则被杀伤后3H-TdR释放至细胞外,通过测定肿瘤细胞释放3H-TdR的量来反映TNF-α的杀伤活性。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 0.25 %胰蛋白酶消化处于对数生长期的L929细胞
2. 用RPMI1640洗涤细胞后,调整细胞浓度至2×106 /ml
3. 加入3H-TdR,20 μci/ml
4. 置37 ℃,5 %CO2培养箱中2~3 h,摇动1 次/30 min
5. 用RPMI1640洗涤2次,800 rpm×5 min/次
6. 调整细胞浓度至2~3×105 /ml后,加入96孔培养板中,100 μl/孔
7. 加入不同稀释度的待测样本(设三个重复孔)
11. 烤干后,进行β计数
放线菌素D对照组cpm-实验组cpm 放线菌素D对照组cpm-标准品cpm 展开 |
注意事项 | 1. 用于标记3H-TdR的L929细胞要处于对数生长期,否则3H-TdR掺入率低,影响实验结果。 展开 |