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细胞膜糖类电镜显示实验——钌红染色法

2019.4.07
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zhaochenxu

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细胞膜糖类 电镜 显示技术 免疫组织化学实验技术及应用 第十四章


细胞膜糖类电镜显示实验可以用于:观察细胞膜上的糖蛋白和糖脂。其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。

实验方法原理

钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。

实验材料

组织样品

试剂、试剂盒

钌红原液戊二醛二甲胂酸钠缓冲液锇酸

仪器、耗材

移液枪

实验步骤

1. 钌红原液配制


钌红溶于双蒸水,浓度为 10 mg/ml,60℃,振荡 10 min,3000 r/min 离心约 15 min,取上清冷藏保存。


2. 前固定液 3% 戊二醛 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。


3. 后固定液 2% 锇酸 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。


4. 标本切小(1 mm3),置于前固定液中室温 1 h。


5. 0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液漂洗3次,每次 3 min。


6. 1% 锇酸后固定液中室温固定 2 h。


7. 漂洗、脱水、包埋同常规。

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注意事项

细胞质膜用重金属染料如:钌红染色后,在电镜下可显示厚约10~20nm的结构,边界不甚明确.

其他

在植物病虫害组织切品染色中,可将宿主植物组织中菌丝体和孢子染成红色。

来源于《免疫组织化学实验技术及应用》



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