细胞膜糖类 电镜 显示技术 免疫组织化学实验技术及应用 第十四章
细胞膜糖类电镜显示实验可以用于:观察细胞膜上的糖蛋白和糖脂。其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。
实验方法原理 | 钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 钌红原液配制 钌红溶于双蒸水,浓度为 10 mg/ml,60℃,振荡 10 min,3000 r/min 离心约 15 min,取上清冷藏保存。 2. 前固定液 3% 戊二醛 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。 3. 后固定液 2% 锇酸 2.5 ml,0.2 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.3)2.5 ml,钌红原液 2.5 ml 顺序混合。 4. 标本切小(1 mm3),置于前固定液中室温 1 h。 5. 0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液漂洗3次,每次 3 min。 6. 1% 锇酸后固定液中室温固定 2 h。 7. 漂洗、脱水、包埋同常规。 展开 |
注意事项 | 细胞质膜用重金属染料如:钌红染色后,在电镜下可显示厚约10~20nm的结构,边界不甚明确. |
其他 | 在植物病虫害组织切品染色中,可将宿主植物组织中菌丝体和孢子染成红色。 |