DEAE-Affi-Gel Blue层析法分级分离IgG
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1）根据制造商的说明准备DEAE-Aff1-Gel Blue柱子。于4℃用5倍柱床体积的加样缓 冲液平衡（7 mL柱床体积/mL抗血清或腹水）。 2)于4℃下透析含1g的样品40 h,中间换2次加样缓冲液（每次换大约4 L） 3)加样上柱，速度为10 mL/h。以同样的速度用3倍柱床体积的加样缓冲液洗脱未结 合的蛋白质。 4)用洗脱缓冲液以10 mL/h的速度洗脱结合的1gG组分。以10 mL为一组分分部收集 洗脱液，并储存于4℃，直至合并各组分。 5) 每组分取30〜50 μl,用10% SDS-PAGE在还原条件下分析，检测含1gG 的组分。 在还原条件下，IgG的重轻链将分开，相应的分子质量分别为50 OOO Da和25 OOO Da。 在这一步可测定污染的转铁蛋白的量，可用凝胶过滤层析法除去。 6) 合并含有IgG的组分，在4℃下透析大于40 h,期间换2次所需缓冲液（每次换 4 L） 7) 用5倍柱床体积的加样缓冲液重新平衡DEAE-Aff1-Gel Blue柱，加少许NaN3晶体阻止细菌生长，储存于4℃。 展开 |
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