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免疫酶标技术——双PAP法

2019.4.07
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验方法原理这种方法可在复合物体系中连接更多的PAP复合物，对抗原可进一步放大，因此灵敏度更为增强，适用于微量抗原的检测。
实验材料

抗体

试剂、试剂盒

PBSH2O2血清DAB苏木精

仪器、耗材

显微镜

实验步骤

1.  标本固定后，PBS洗涤；


2.  1 %H2O2（或1 %H2O2甲醇）阻断内源性过氧化物，室温10～20 分钟；


3.  PBS洗2×3 分钟；


4.  正常血清（二抗的正常血清）孵育，室温20 分钟；


5.  滴加一抗，室温1 小时或4 ℃过夜；


6.  PBS洗3×3 分钟；


7.  滴加二抗，室温30 分钟；


8.  PBS洗3×3 分钟；


9.  加PAP复合物，室温60 分钟；


10.  PBS洗涤3×3 分钟；

11.  二次加酶标二抗；


12.  PBS洗；


13.  二次加PAP；


14.  PBS洗；


15.  0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5～10 分钟；


16.  苏木素复染核，封片，镜检。

 

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