病毒的血清学实验—ELISA检测乙脑病毒早期特异性IgM抗体

2019.4.09

zhaochenxu

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实验方法原理	将抗μ链球蛋白（豚鼠抗兔IgM 抗体）非特异地吸附在固相上，加入待检乙脑病人血清，血清中的IgM 能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病（JBEV）抗原和酶标记的相应抗体（兔抗IBEV IgG）时，病人血清抗体再与IBEV 抗原和酶标抗IBEV IgG 结合作用于酶底物，酶底物显色反应，借此可测出血中IgM 抗体的含量。
实验步骤	1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 （g/ml，加至40 孔板，每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时，再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。 2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40 孔板，每孔0.2 ml。置湿盒，37 ℃1 小时，用洗涤液洗三次。 3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中，每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜，用洗涤液洗三次。 4. 用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEV IgG，加至40 孔板，每孔0.2 ml，37 ℃l 小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2 ml。避光置室温30 分钟。加2M H2SO4 0.05 m1，终止反应。用分光光度计测出各孔OD 值，波长选择495 nm。 4. 结果 P/N （3.0 为血清JBEV IgM 抗体阳性。标本平均OD 值- 空白对照OD 阴性对照OD 值一空白对照OD 展

实验方法原理

将抗μ链球蛋白（豚鼠抗兔IgM 抗体）非特异地吸附在固相上，加入待检乙脑病人血清，血清中的IgM 能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病（JBEV）抗原和酶标记的相应抗体（兔抗IBEV IgG）时，病人血清抗体再与IBEV 抗原和酶标抗IBEV IgG 结合作用于酶底物，酶底物显色反应，借此可测出血中IgM 抗体的含量。

实验步骤

1. 用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 （g/ml，加至40 孔板，每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时，再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。

2. 用稀释液稀释待检血清，然后加至40 孔板，每孔0.2 ml。置湿盒，37 ℃1 小时，用洗涤液洗三次。

3. 用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中，每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜，用洗涤液洗三次。

4. 用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEV IgG，加至40 孔板，每孔0.2 ml，37 ℃l 小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2 ml。避光置室温30 分钟。加2M H2SO4 0.05 m1，终止反应。

用分光光度计测出各孔OD 值，波长选择495 nm。

4. 结果

P/N （3.0 为血清JBEV IgM 抗体阳性。

标本平均OD 值- 空白对照OD

阴性对照OD 值一空白对照OD

展

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