技术和方案26 小量提取E.coli DNA

1.将单菌落接种于 3 ml 含有 100 ug/ml 氨节青霉素的 Terrific broth 培养基中，37°C 培养过夜。

2.取 1.5 ml 细胞悬液于微量离心管中，13000 r/min 离心 1min，弃去上清。

3.加入 100 ul 溶液 1[50 mmol/L 葡萄糖/10 mmol/LEDTA/25 mmol/L Tris(pH8.0)]，用移液器吸头搅松菌块，使管底一侧的细胞脱落下来，用旋涡振荡器完全悬浮细胞。

4.加入 200ul 溶液 2(0.2mol/L NaOH/l%SDS)，颠倒微量离心管 4 次混勻。冰浴 5 min。

5.加入 150ul 溶液 3(3mol/L 钾盐/5mol/L 乙酸盐），上下轻摇管子 4 次混匀。冰浴 5 min。

6.13000r/min 离心 5 min。

7.将上清倒人一个装有 500ul 苯酚的离心管中，旋涡振荡器充分混合，13000r/mm 离心 5 min。

8.取 300ul 上清移入一个洁净离心管，加入 750ul 100% 乙醇，振匀，室温放置 2 min。

9.13000r/min 离心 5 min 沉淀 DNA。倒去上清，倒扣于纸巾上约 5 min 排干液体。

10.以 50ul 溶液 4[TE (pH8.0)+10ug/ml RNase A] 悬浮 DNA 沉淀。