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显微图像分析仪(Optimas 6.0)的操作实验

2019.4.12
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zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身

实验方法原理在以抗原抗体特异性结合为基础原理的免疫组化实验中,由于不同实验条件影响下抗原量的不同,会使不同动物同一区域组织片的染色图片呈现色彩深度上的差异。在图象分析中,这样的色彩深度差异即表现为单位面积灰度积分值的不同。图象分析的最终目的,即是根据染色深浅导致的灰度值大小不同,来半定量地比较对照组和实验组、各不同条件实验组的组织染色的差异。
仪器、耗材

光学显微镜;PixeLINK 数字摄像头;电脑(操作系统windows;软件optimas)

实验步骤

1.  在染色片置于光学显微镜下,并用图象捕获软件捕获适当放大倍数下的图象。

2.  在 optimas 中打开图片。

3.  将图片转换成灰度模式。

4. 选定自己所染的目标区域,例如 pvn 区或海马区或 son 区。

5.  确定域值。

6.  指挥计算机根据域值选出符合条件的区域。

7.  将区域的面积、光密度积分值等数据传输到 excel 里。

8.  在 excel 里计算自己所需的目标区域的平均光密度值,并利用它含的统计功能求出统计数值,绘出统计图表

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注意事项

在免疫组化结果分析中 Optimas 的几个关键工具
 
当 optimas 被用于免疫组化结果图象的分析时,有几个关键的软件工具是必须重点提一提的。

1.  目标区域选择工具:用鼠标点击这几个工具后,在图上拖动,可以不同的形状选择自己感兴趣的区域,例如正方形,不定形,或椭圆形。

2.  域值调节工具:在灰度模式图象的色彩值中,0表示黑色,255表示白色。当我们调节域值时,电脑根据我们选定的值的范围,选择符合的图象区域,被选中的区域称为前景,呈现黄色,未被选中的,则是背景。
调节域值,可见参照显示标准为域值线。点开域值调节面板后,可以通过拖动上下两个滚动条、鼠标移动,或者手工输入灰度值,来确定自己所需要计算区域的色彩域值。

 
3.  自动区域寻找工具:设定域值后,点击此工具,软件会根据域值在目标区内自动生成符合要求的小区域,以红线圈出。此区域也就是我们将从中收集数据的区域。
 
4.  数据收集设置:可在此面板中设定所需收集的数据类型,数据输出后的目标软件。

 
5.  宏记录工具:利用此工具,可以将自己需要反复进行的操作记录下来,以后执行每一次相同操作时,运行宏即可以。

 
 

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