实验步骤 | 一、. 实验试剂:
1. 无水乙醇
2. 10/1000 间二硝基苯溶液
3. 5mol/L的KOH
4. 70%去醛乙醇
5. 雄酮标准溶液(1ml=0.2mg)
二、实验操作方法:
l. 取洁净容器加人10ml浓HCL作为防腐剂。然后收集24h尿液准确记录总尿量。
2. 将尿液混匀吸取5ml于三角烧杯中,加冰酯酸5ml加热沸腾,回流水解10min,流水冷却。
3. 此经水解的尿液放入分液漏斗中,加入乙醚(AR)约20ml振摇2-3min,静置分层以后,弃去下层尿液.
4. 加lmol/L的NaOH 10ml轻轻颠倒20次,弃去NaOH层,再加蒸馏水15ml轻轻颠倒20次,弃去NaOH层,再加蒸馏水15mL轻轻颠倒20次,弃去水层。
5. 将洗过的乙醚提出液放入一只有20ml刻度的大试管中,用少量乙醚洗漏斗壁,此洗涤乙醚放入大试管中,然后加乙醚补充至20ml刻度混匀。
6. 取2支大试管每管各取上乙醚提出液5ml一管作测定,另一管作测定空白,置37℃干燥箱中使乙醚挥发干。
7. 取上述制备的标准管一支,内含雄酮0.02mg。
以上各管按表进行操作:
混匀在530nm波长处以70%去醛乙醇溶液调零分别读取各管吸光度。
三、 计算:
(测定管吸光度-测定空白管吸光度-试管空白吸光度)/(标准管吸光度-试管空白吸光度)×0.02×24h尿总量(ml)/[(5/20)×5]= 17-酮类固醇mg/24h尿 展开 |
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