实验概要
mESCs传代
主要试剂
细胞基础培养液、DPBS、mES培养液A、mESCs培养液B、0.25% Trypsin
主要设备
35 mm、60 mm、100 mm培养皿、15 mL离心管、50 mL离心管、冻存管、倒置显微镜、离心机
实验步骤
（1）传代前一天准备好饲养层细胞，饲养层细胞要求接种密度大致为2×105细胞/cm2，切忌密度过高。
（2）mESCs一般培养2～3天需要传代，尽量不超过3天传代。
（3）传代之前首先在37℃水浴锅中预热0.25%Trypsin、细胞基础培养液、DPBS和mESCs培养液A或者B。
（4）吸弃细胞培养液，然后用DPBS轻轻冲洗一遍贴壁细胞，弃掉DPBS之后加0.25%Trypsin，放在培养箱中消化3～4 min，消化过程中在显微镜下观察消化的效果，当克隆成为单个细胞时即可加入等体积的细胞基础培养液终止消化。
（5）将终止消化后的细胞悬液移到15 mL的离心管中，室温1000r/min离心5 min，弃上清。
（6）用适量的mESCs培养液A或者B重悬离心后的细胞，将其接种到新的饲养层细胞上。
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