细胞亚群分析

实验概要

对一群细胞依据是否表达特定蛋白进行亚群分析是细胞鉴定中的常用实验。一般通过特异性抗体标记细胞，通过流式细胞术或磁珠等方法分离细胞。

实验原理

利用抗原抗体反应，使表达目标抗原的细胞带上标记，通过流式细胞仪或磁珠，对带有标记的细胞进行分选/分析。这种方法结合流式细胞术和免疫染色，能够快速、大量、特异性较高地分析细胞亚群

主要试剂

0.25%Trypsin、细胞基础培养液、DPBS、封闭液和抗体稀释液

主要设备

15 mL离心管、300目尼龙滤膜、流式细胞管

实验步骤

（1）消化：用0.25％Trypsin进行消化，加入2倍体积的细胞基础培养基进行终止，收集消化好的细胞悬液进行离心（1000转5min），弃上清；
（2）洗涤：用DPBS液洗1遍，离心（1000转5min），弃上清液；
（3）封闭：加入封闭液，孵育30 min。
（4）一抗反应：参考一抗的说明书，按照适当比例用抗体稀释液稀释一抗并加入适量的抗体。同时准备一管不加抗体的细胞作为对照。室温孵育1 h。DPBS洗涤3次，每次1000转离心5 min。
（5）二抗反应：参考二抗的说明书，按照适当比例用抗体稀释液稀释荧光标记的二抗。加入二抗稀释液，室温孵育30 min。DPBS洗涤3次，每次1000转离心5 min
（6）上机检测，用流式细胞仪分析细胞亚群。先测对照管，调节电压确定阴性区，再测试验管。能与抗体结合的细胞会发出相应的荧光标记，分选出阳性区间的细胞。流式细胞仪使用及注意事项详见“流式细胞分析”。