石蜡切片免疫组化步骤

实验概要

石蜡切片免疫组织化学染色

主要试剂

染色缸；染色架；保湿盒；晾片盘；微量移液器；0.2MPBS，乙醇，二甲苯，BSA，中性树胶等

实验步骤

1.     石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟；

2.     脱蜡和水化：二甲苯(10min)→二甲苯(10min)→无水乙醇(5min×2次)→95%乙醇(5min×2)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →80%乙醇(5min) →75%乙醇(5min)；

3.     蒸馏水冲洗2次5min；

4.     加3%H₂O₂孵育30min(室温)；

5.     蒸馏水洗2次；

6.     抗原修复：高压修复或微波修复

柠檬酸修复液：柠檬酸0.4g 柠檬酸钠3g配成1000ml

高压修复：高压2min；微波修复：预热5min，高火4min，中火5min；

7.     PBS洗3次各5min，封闭30min；

8.     滴加一抗，4℃过夜或37℃孵育2~3h；

9.     PBS冲洗3次各5min；

10.  滴加二抗，37℃孵育30~60min；

11.  PBS洗3次各5min；

12.  DAB显色，自来水充分冲洗；

13.  苏木素复染，自来水充分冲洗；

14.  脱水、透明各5~10min；

15.  封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。