RAPD技术

实验概要

RAPD(Random  Amplified Polymorphic  DNA,随机扩增的多态性DNA)是建立于PCR实验基础上的检测基因组DNA多态性的实验技术。从1990年Williams首次应用该技术到今，短短几年间，该技术由于具有快速、简便、耗资相对较少，所需设备较少的特点，因此发展极快，目前已在农、林、牧、医等领域得到了广泛的应用。

该技术利用大量的、各不相同的、碱基顺序随机排列的寡聚单核苷酸链为引物，以待研究的基因组DNA片段为模板，进行PCR扩增。扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳等分离，经染色后，即可对此基因组DNA进行多态性分析。本实验即拟通过以一种随机片段为引物进行PCR扩增，以便了解和掌握最基本的RAPD操作技术。

主要试剂

10mer随机引物、Taq酶、dNTP、10×缓冲液、无菌水、石腊油、电泳试剂

主要设备

PCR仪、离心机、取液器、电泳仪、电泳槽、 紫外观测仪

实验步骤

1. 基因组DNA提取(略)。

2. 取0.5mlEppondef管,加入

基因组模板DNA    20ng                  PCR扩增参数

10×PCR缓冲液       1ul                    94℃  变性  １５秒

10μM的dNTP         0.2ul                 36℃  褪火  ３０秒

10mer随机引物      0.4ul                 72℃  延伸  ４５秒

Taq酶(5u/ul)           0.1ul                  46个循环，结束后，72℃延时４分钟

加水至              10μl   混匀后离心

再加入10μl石腊油，离心后，进行PCR扩增。

3. 扩增产物与电泳上样液混匀，1.5% Agrose胶电泳分析。