脂肪间充质干细胞原代分离

实验概要

本实验方法介绍了脂肪间充质干细胞原代分离所需试剂及操作流程。

主要试剂

所用试剂盒：

小鼠脂肪干细胞分离和培养试剂盒             货号：MADS-000-001

大鼠脂肪干细胞分离和培养试剂盒             货号：RADS-000-001

兔子脂肪干细胞分离和培养试剂盒             货号：RaADS-000-001

猪脂肪干细胞分离和培养试剂盒               货号：PADS-000-001

牛脂肪干细胞分离和培养试剂盒               货号：BADS-000-001

人脂肪干细胞分离和培养试剂盒               货号：HADS-000-001

规格：5次              

实验步骤

1. 获得脂肪组织。

2. 将脂肪组织用含有双倍双抗的PBS漂洗，把血块洗干净。

3. 将脂肪组织放入少量PBS中

4. 眼科剪反复剪碎成大约1mm³细小组织块；

5. 加入2ml左右1mg/ml胶原酶Ⅰ消化液转移至15ml离心管中，37ºC恒温摇床振荡消化30min，见基本没有大的组织块后，加入等体积成纤维细胞培养基中止消化，离心1000rpm，8min沉降细胞。

6. 弃去上清液及悬浮脂肪组织，加入脂肪间充质干细胞完全培养基，接种于87.5px皿中，置于37℃ CO₂培养箱中培养。

7. 第二天观察细胞，渣滓比较多，但此时根据细胞状态决定是否换液。

8. 3～5 d 达到增殖高峰,呈集落样生长,在6～8 d 后达到80 %左右融合传代。

注意事项

1. 注意原材料的新鲜与保鲜。一般取来的材料都是当天来做，而且取材时最好是放在含有双抗的PBS里，用冰盒运输。

2. 取材时要保持严格的无菌操作

3. 将组织漂洗干净，不要残留血块和毛发。

4. 取材时要选用锋利的手术器械，防止损伤组织。

5. 消化时间要掌握好，控制在大的组织块刚刚完全消化完。

6. 要标记好细胞的品系，周龄，雌雄等信息。

7. 注意要用胶原酶I，而且消化时要加入DNA酶，防止粘稠。