实验概要
本方法是先将凝胶紧贴于一块硝酸纤维滤膜，然后再将这种夹层组合直接置于两个乎板电极之间，采用这种半干方法可将蛋白质从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上。平板可以是石墨(这种平板较便宜，但使用100次后必须更换)制成的，也可以是铂金的(这种子板价格较贵，但使用寿命较长)。通过电洗脱将蛋白质从凝胶中转印至滤膜上，就像在凝胶中迁移一样，只不过此处蛋白质的移动方向与胶平面垂直。该法转印速度快，均匀，亦不需较大的功率。在最早的文献中，阴极和阳极使用的是不同的缓冲液，但使用稀释的Tris／GlycineSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液系统较为简便。只需在阴极和阳极两边放入若干层预湿的玻璃纤维滤纸即可保持电极、凝胶和滤纸之间的良好接触。
主要试剂
硝酸纤维素滤膜
蒸馏水或去离子水
考马斯亮蓝染色液
转印缓冲液(0.04％SDS，20％甲醇溶于48mmol／LTRIS，39mol／L甘氨酸)
吸水纸(Whtaman 3 MM或替代物)
主要设备
半干转印装置
实验步骤
1. 用蒸馏水淋洗半干装置的平板电极。
2. 将凝胶切成适当大小用于转印。除去无关的凝胶和未使用的泳道。做好凝胶标记以确定第一条泳道的去向(一般是剪去凝胶底部的左手边角)。在准备滤纸时，将凝胶放入转印缓冲液中。
3. 剪取6张吸水纸(Whatman3MM或替代物)和1张硝酸纤维素膜，使其大小与凝胶相同。操作时要戴手套，硝酸纤维素膜应是未用过的。硝酸纤维素膜上蛋白质的结合键型尚不清楚，但油污或其他蛋白质可阻碍此种结合。
确信滤纸剪成适当大小。如果滤纸与凝胶的边缘重叠，电流将短路而绕过凝胶，使转印不能有效进行。一个可行的办法是以封口膜(Paprafilm)作为垫子绕在凝胶的周围并将平板分开。
4. 将硝酸纤维素膜浸入蒸馏水中。通常是小心地将硝酸纤维素膜放在水面上使其浸湿。通过毛细吸管作用从底部开始浸湿硝酸纤维素膜(数分钟)，然后将膜浸入水中2min。再将膜放入转印缓冲液中。
5. 将吸水纸放入转印缓冲液中浸湿。
转印缓冲液的配制：
Tris碱 48mmol／L 5.8g
甘氨酸 39mmol／L 2.9g
SDS 0.04％(v／v) 0.37g
甲醇 20％ 200ml
蒸馏水加至1000ml
6. 将凝胶、硝酸纤维素膜和滤纸放在平板装置的底部。检查底部平板的极性。
7. 仔细检查有无气泡，并用戴有手套的手驱赶气泡或用1支干净吸管在夹层组合上滚动将气泡赶出。吸干凝胶—滤纸夹层组合旁边的缓冲液。许多装置在凝胶-滤纸夹层组合旁边有一个垫圈以防转印时发生短路。
8. 小心将电极插入装置顶部。接通电极(正极或红色表示阳极)并进行转印。以0.8mA／Clll2凝胶，转印45min至1．5ho转印时间不宜太长，否则易引起干胶。
9. 转印结束后立即断开电源，小心拆开装置，将膜做上标记(通常是剪去底部左手边角，指定为第一泳道)。电极用后要用蒸馏水清洗。
10. 用考马斯亮蓝对聚丙烯酰胺凝胶进行染色或银染以验证转印物。对硝酸纤维素膜适当处理后进行染色或封闭。
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