实验概要

本实验应用³H-TdR掺入法检测了IL-2的生物活性。

主要试剂

1. 10% Fcs-RPMI-1640完全培养液

2. ³H-TdR

3. IL-2标准品：倍比稀释为不同浓度

主要设备

96孔培养板，刻度吸管，毛细吸管，刻度离心管，离心机，加样器(头)，细胞计数板，倒置显微镜，超净工作台，CO₂培养箱，微量细胞收集仪，玻璃纤维滤纸，ß液闪计数仪

实验材料

1.反应细胞：CTLL-2，存活率应＞95%

2.待测样品：倍比稀释为不同浓度

实验步骤

1.用10 %FCS-RPMI-1640培养液洗涤CTLL-2细胞2次，1000r/min离心5min，以去除原生长培养液(含IL-2)；

2.用10% Fcs-RPMI-1640培养液调细胞浓度为1×10⁵/ml；

3.将不同倍比稀释度的IL-2的标准品和待测样品分别加入96孔细胞培养板，100μL/孔，各设3复孔，同时设培养液对照；

4.各孔均加入CTLL-2细胞悬液，100μl/孔；

5.置37℃，5%CO₂培养箱中培养24h；

6.每孔均加入³H-TdR，0.5μci/孔，继续培养4-6h；

7.用微量细胞收集仪收集细胞于玻璃纤维纸上，用ß液闪计数仪测定各孔cpm值。测定CPM值的最佳时间应是培养液对照(无IL-2)细胞全部或大部分死亡而加有IL-2孔细胞生长旺盛时。

注意事项

用¹²⁵I-UdR代替3H-TdR进行IL-2活性检测。其优点是不需ß液体闪烁测定所需的试剂和设备，只需一台小型γ计数仪即可，并可节省时间和减少ß液体闪烁操作中出现的误差。其缺点是¹²⁵I-UdR半衰期较短，需要定期供应。基本方法同³H-TdR掺入法，只是用¹²⁵I-UdR代替³H-TdR，0.2μci/孔，然后再加入1mmol/L的5-氟尿嘧啶5μl，继续培养24h，收集细胞用γ计数仪测定cpm值。