实验概要

一种简单快速提取单头小型昆虫基因组DNA的方法。

主要试剂

1. 蛋白酶K[美国Merck公司]

2. 三羟甲基氨基甲烷(Tris)[美国Amresco公司]

3. Taq DNA聚合酶及dNTP[NEB公司]

4. 琼脂糖及溴化乙锭(EB)[美国Amresco公司]

5. 乙二胺四乙酸钠(Na2EDTA)[美国Amresco公司]

6. 电泳缓冲液TBE：浓贮存液5×TBE：54.0 g Tris碱，57.1 g硼酸，20 ml 0.5 M EDTA，pH=8.0，加蒸馏水定容至1 L，工作液为稀释的0.5×TBE

7. 裂解液成分：50 mM KCl，10 mM Tris pH 8.4，0.45％ Tween 20，0.2％ gelatin，0．45％ NP40，60 μg/ml proteinase K

主要设备

 1. 高速冷冻离心机(3K-30)[德国Sigma公司]

2. 恒温水浴锅[北京六一仪器厂]

3. 电泳仪[美国Bio-Rad公司]

4. 水平电泳槽[美国Bio-Rad公司]

5. 凝胶成像系统(Gel Doc EQ)[美国Bio-Rad公司]

6. 4℃、-20℃冰箱[日本Sanyo公司]

7. 紫外分光光度计(Beckman Du 650)[日本Sanyo公司]

8. 高压灭菌锅[日本Sanyo公司]

实验材料

烟粉虱成虫

实验步骤

1. 吸10μL裂解液于封口膜上，将一头烟粉虱置于提取液中，用0.2 ml PCR管底部将烟粉虱充分研磨匀浆；

2. 把匀浆液吸入1.5 ml离心管中，再取15 μL裂解液清洗封口膜研磨处，将清洗液与匀浆液合并；

3. 65℃水浴30分钟，将离心管从水浴锅中取出；

4. 接着沸水浴10分钟，使蛋白酶K失活；

5. 短暂离心后，每管加入25 μLddH₂O，即可用于PCR反应，或储藏于-20℃冰箱中。

6. 吸取1 μL的DNA样品，加水稀释50倍至50 μL至充分混匀，放置于比色皿中，以50 μL纯水作为对照校正零点，然后检测待测样品的OD260/280值。

7. 利用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取结果