MS培养基配制标准操作程序

实验概要

建立一个MS培养基配制标准操作程序，使操作过程标准化。

实验步骤

1  MS培养基母液的母液的配制
       由于组培的植物不同，需要配制不同的培养基，为减少工件量，可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低，因此，先配制成母液的母液。建议浓度如下表: 

        母液的母液的配制过程:
 

        （1）根据表中的浓度，称取50ml体积的药品的质量。

        （2）加入到相应的溶液中，定容至50ml。

        （3） 放入密封50ml塑胶管中，-20℃保存。

2  MS培养基母液浓度表：

        （1）MS-A（macro）：为工作液浓度的50倍
 

        （2）MS-B（micro）：为工作液浓度的100倍
     

        （3） MS-C：为工作液浓度的100倍

        （4） MS-D：为工作液浓度的100倍

 


        （5）MS-E：为工作液浓度的100倍

3  母液的配制

    MS-A：称取NH4NO3  41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。

    MS-B：吸取母液的母液如下，蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。

    MS-C：称取CaCl2·2H2O 22.0g蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。

    MS-D：吸取母液的母液如下，蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.

 
    MS-E：称取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。

4  MS培养基基本工作液的配制　

     MS培养基基本工作液质量表

    （1）配制1升工作液，烧杯中放入700ml左右的蒸馏水，按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。

    （2）加入固体蔗糖30g（根据具体实验调节浓度），溶解。

    （3） 加入所需的激素。定容至1000ml。

    （4）0.1－1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。

    （5）如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%～15%。

    （6） 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。固体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入三角瓶等培养器皿中，封口消毒。

    （7）工作液配制的注意事项:

           由于培养基内有丰富的营养物质，极利细菌和真菌繁殖，造成污染，影响组培的成功，一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。

           高温高压消毒: 一般用消毒锅消毒，注意消毒锅不能装的过满，锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右，大约15－20分钟即可。

           过滤消毒: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等，不宜用高温高压法消毒，可用过滤消毒，可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中，过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行，以避免污染培养基。