干化学试纸法与全自动生化分析仪酶法生化项目检测

干化学又称为固相化学, 是将一项测定中所需的全部或部份试剂预固定在载体中, 根据Kubelka - Munk 理论, 其反射率(R) 和固相层的厚度(X) , 单位厚度的光吸收系数(K) 及固相反应层的散射系数(S) 有关, 当K和S 固定时, R 仅同K有关, 而K的大小同待测物的浓度成正比,用反射光度计检测R 的大小, 可计算出待测物的浓度[1 ] 。
因急诊生化检验工作量大, 我院检验科添置了瑞士Roche公司产Reflotron òsprint 全血干式生化分析仪, 这是一种适用干大中型现代化医院急诊实验室的诊断仪器, 能即时测定17 种临床测试项目(AKP、AMY, BIL、CH、CK、CREA、GGT、GIU、GOT、GPT、HDL-C、HGB、K+ 、P-AMY, TG、UREA、UA) , 有三个独立的检测单位能同时工作, 2～3 分钟内可得到3 个不同的检测结果, 操作简易, 样本可以是全血、血浆或血清, 无需预热试剂, 3 个简单步骤即可得出结果, 无需定标, 试纸条有效期长、易保存(部分可室温保存) 。因其体积小, 占用空间不大, 适用于临床实验诊断中心(检验科) 急诊化验室生化项目的检测。
为了保证检验结果的可靠性, 我们用Reflotron òsprint全血干式生化分析仪和TOSHIBA 40FR 全自动生化分析仪对急诊生化检验中最常用的检测项目Glu、Cr、Urea、a-Amy进行检测, 对检测结果的相关性、重复性、精密度进行对比分析, 结果如下。
材料与方法
1 　仪器和试剂　(1) 瑞士Roche 公司Reflotron òsprint 全血干式生化分析仪及其干化学法血糖(Glu) 、肌酐(Cr) 、尿素(Urea) 、a2淀粉酶(a-Amy) 测定试纸条; (2) 日本东芝公司产TOSHIBA 40FR 全自动生化分析仪。Glu 和Urea 测定采用上海复星长征产液体试剂盒, Cr 和a2Amy 测定采用温州东瓯生物工程有限公司所产液体试剂盒。Glu 以试剂盒自带标准液定标校准; Cr、a2Amy 以英国RANDOX CalibrationCAL 2350 (Lot 235UN/ 1) 、Urea 用CAL 2351 (Lot 160UE) 定标校准。
2 　标本来源　门诊及住院病人100 例, 其中男性52 例, 女性48 例; 年龄35～75 岁, 平均(5316 ±211) 岁。标本为检验科门诊空腹抽血标本及病房送检生化检验标本, 待血液凝固后分离血清分别进行GLU、Cr、Urea、a-Amy 的干化学试纸法和全自动生化分析仪酶法检测。用BECKMAN 未定值人血基质质控血清Level 1 (批号: M204241) 、Level 3 (批号: M204243) 分别在二台仪器上各进行10 批次检测。
3 　检测方法　(1) 干化学法: 直接加定量血清32ul 干试纸条上, 待完全渗透后即在Reflotron òsprint 全血干式生化分析仪进行检测。(2) 酶法: 血糖采用葡萄糖氧化酶法(GOD2POD) 、尿素采用尿素酶( 尿素酶—谷氨酸脱氢酶GLDH) 法、肌酐采用肌氨酸氧化酶法、a2淀粉酶采用对硝基苯麦芽庚糖苷( 4NP2G7 ) 法[2 ] 检测。用RANDOXCalibration CAL2350 (Lot : 235UN/ l) 、CAL2351 (Lot : 160UE)标准液和血糖标准液定标校准后, 进行检测, 分析上述4个项目在2 台仪器上检测结果有无显著性差异。(3) 批内精密度试验: 用BECKMAN 未定值人血基质质控血清level 1(批号: M204241) 、level 3 (批号: M204243) 分别在2 台仪器上进行10 批次检测, 计算批内精密度(CV %值) 。
4 　统计方法　配对t 检验和直线回归与相关分析, 统计软件采用SPSS 1110。结　　果
1 　对比实验　在Roche Reflotron òsprint 干式生化分析仪和TOSHIBA 40FR 生化分析仪上同时对100 例急诊生化标本进行Clu、Cr、Urea、a2Amy 检测分析, 检测结果分析, 4 个项目各项检测结果在2 台仪器上相关系数r 分别为01982、
01991、01987、01992 , 均> 01975 , 且差异无显著性( P >0105) 。
2 　精密度实验　用RANDOX level 1 和level 3 校准血清各10份分别做批内精密度试验, 实验结果见表1。Roche eflotron
òsprint 干式生化分析仪和TOSHIBA 40FR 生化分析仪各项目检测结果的精密度CV 值在0185 %～4192 %间, 精密度良好, 重复性也较好。

讨　　论
100 例病人生化标本用干生化试纸法和全自动生化分析仪酶法检测Glu、Cr、Urea、a-Amy , 各项目的相关系数r 均> 01975 ; 两种方法对各项目检测值的配对t 检验P > 0105 ,表明Roche Reflotronòsprint 干式生化分析仪和TOSHIBA 40FR生化分析仪检测结果有很高的相关性, 检测结果无显著性差异, 显示Reflotron òsprint 干式生化分析仪(干生化试纸
法) 在敏感性、特异性方面均符合要求。
用BECKMAN 未定值人血基质质控血清level 1 ( lot :M204241) level 3 ( lot : M204243) 对Glu、Cr、Urea、a2Amy在Roche Reflotronòsprint 全血干式生化分析仪(干化学试纸法) 和TOSHIBA 40FR 生化分析仪(酶法) 上各进行10 批次的测定结果分析表明, 各仪器各项目检测结果稳定, 精密度(CV 值) 1156 %～4156 %之间, 仪器的稳定性、重复性良好。而且我们在测定分析中发现, 大部分项目测定Reflotron òsprint 全血干式生化分析仪在批内精密度、重复性方面比TOSHIBA 40FR 生化分析仪上要好。
1985 年开发的干化学多层膜试纸, 使其定量分析水平达到或接近常规湿化学法的水平[3 ] 。多层膜试纸其独特的优点是采用多层膜技术, 不仅能掩盖待测物的有色物质并提供背景, 选择性地阻留或去除的干扰物质, 而且还将等同于湿化学反应原理的各种物理、化学反应在各分层中进行, 使某一层中的产物可进入另一层中进行反应, 从而引导反应序列, 其各层可以给出特定的环境用以控制反应序列和反应时间[4 ] 。随着多学科高新技术发展带动干化学技术的成熟, 试剂载体品种增多, 质量提高, 特别是信号检测系统—反射光度计技术的日益完善, 使干化学分析技术不但简便快捷, 且准确可靠[5 ] 。此次检测分析表明, 干化学试纸法可为临床提供快速、准确的实验诊断参考依据。
适用于临床实验诊断中心(检验科) 急诊化验室急诊生化项目的检测。