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全自动加样系统造成ELISA实验拖带现象分析

2019.5.10
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玉芳

致力于为分析测试行业奉献终身

全自动加样系统在血站的使用日趋普及,但目前使用的多为固定加样针,这样分配位置在前的样本会使其后的样本出现不同程度的污染,引起假阳性或假阴性,也就是通常所说的拖带现象。拖带现象会导致大量标本待检或试验重做,这样不但增加了工作量,浪费试剂,更为严重的是有可能导致阳性标本的漏检,影响检验质量。现将本站43 242份标本的检测情况作回顾性分析,以寻求有效的解决拖带现象的方法。

  1材料与方法

  1.1标本来源43 242份标本均为本站无偿献血者现场留样抗凝标本。 本文来自检验地带网

  1.2拖带现象的识别通常做酶免实验的96孔微板8行以A~H标示、12列以1~12标示。根据全自动加样系统的分配规律,运行方向是以微板从左到右,即从第1列开始,每次加8孔。ML-STAR有三组钢针,每组8根针,通过循环轮换三组钢针模式实现样本的批处理;Freedom EVO Clinical 200只有一组8根钢针。如果阳性(特别是强阳性)标本后经同一根针所加标本出现一个或多个连续阳性,比如用ML-STAR加样,如果A1阳性,A4或后面每隔2孔也是阳性;若是用Freedom EVO Clinical 200加样,如果A1是阳性,A2或后面的板孔也是阳性,且越往后反应强度越弱则怀疑是拖带所致。

  1.3仪器与试剂Freedom EVO Clinical 200全自动加样系统(瑞士TECAN)、ML-STAR全自动加样系统(瑞士HAMILTON);HBsAg试剂盒由厦门新创和北京万泰提供,抗-HCV试剂盒由北京万泰和北京金豪提供,抗-HIV试剂盒由珠海丽珠和北京金豪提供,TP抗体检测试剂盒由北京万泰和厦门新创提供。

  1.4实验方法按照试剂说明书要求编制加样程序,初、复检四项的加样顺序为HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、TP,先加初检,后加复检,最后加对照。对疑似拖带现象导致假阳性的标本挑出原试管和小辫进行复检,经手工加样双孔复试为阴性则证实为拖带所致的假阳性。

2结果

  本组43 242份标本中因拖带现象引起的假阳性结果,见表1。表1拖带现象导致的假阳性结果有报道[1]称污染现象与实验中加样程序的先后顺序有关,TP加样顺序在后,所以出现前排孔阳性污染后排孔的现象以TP多见。本组结果显示,造成拖带现象最严重的是抗-HIV,抗-HCV和TP也常见。而HBsAg采血前虽经金标试剂筛查,仍有不少漏检,其中不乏HBsAg强阳性者,但因拖带导致HBsAg假阳性则罕见,是与检测试剂的灵敏度有关,还是因为绝大多数献血者血液中含有抗-HBs所致,或者是别的原因,值得进一步探讨。笔者通过观察发现,阳性反应越强拖带越严重,抗-HIV最多连续拖带达8孔,同时发现同一项目不同厂家的试剂拖带程度不同,这可能也跟检测试剂的灵敏度有关。另外一个有趣的现象是,因抗-HIV阳性而造成后面拖带的百分之百都是HIV确证阳性,而抗-HIV假阳性哪怕反应有多强都不会引起拖带现象。 检验地带网

  3讨论

  对于全自动加样系统所出现的拖带现象,有报道用改变冲洗方式[2]或定期用HCl和NaOH冲洗和浸泡加样器的管道等方法来解决[3],但笔者认为最好的解决办法是使用一次性加样针,这才是最根本的解决办法。在没有改用一次性加样针的情况下,遇到拖带现象则应将被污染的标本重新取样进行再检,以避免假阳性的产生,而因拖带所致的HBsAg假阴性则难以避免,因为如果拖带抗-HBs会中和HBsAg。现在有的血站利用全自动加样系统进行同步留样保存标本[4],如果用的还是固定加样针,肯定会造成样本之间的交叉污染,这样的留样就会失去其意义,所以说使用一次加样针是势在必行。实践证明本站最近Freedom EVO Clinical 200全自动加样系统采用一次性加样针已无拖带现象出现。


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