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RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)的优缺点

2019.5.20
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zhaochenxu

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RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:
1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失,使灵敏度下降,而RPA将所有杂交体系进行电泳,故损失小,提高了灵敏度。
2. 由于PCR扩增过程中效率不均一和反应“平台”问题,基于PCR产物量进行分析所得数据的可靠性将下降,而RPA没有扩增过程,因此,分析的数据真实性较高。
3. 由于与反义RNA探针杂交的样品RNA仅为该RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA样品仍可进行分析。
4. 步骤较少,耗时短。与Northern杂交相比,省去了转膜和洗膜的过程。
5. RNA-RNA杂交体稳定性高,无探针自身复性问题,无须封闭。
6. 一个杂交体系中可同时进行多个探针杂交,无竞争性问题。
7. 检测分子长度可以任意设置,灵活性大。

RPA的缺点是需要同位素标记探针。 

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