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如何提取及测定海带中的叶绿素?

2019.5.31
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

海带是一种营养价值很高的蔬菜,由于海水可被利用的光能要比陆地上少得多,要完成能量的转换,必须增高参与光合作用的叶绿素的含量。所以,一般来说,海带中叶绿素和其他辅助色素的含量高于陆生植物。叶绿素依其结构不同可分为叶绿素a和叶绿素b,其基本结构都是镁结合的卟啉环。当前测定叶绿素的常规 方法多为溶剂浸提-可见分光光度法,用超声波萃取分离出叶绿素,然后用氢离子置换出镁离子,再用原子吸收分光光度法测镁的量即可计算出海带中叶绿素的含量,以及专业的叶绿素测量仪法。这些方法都是叶绿素测定的最常用方法,我们在具体操作过程中,要按照不同的需求,进行合理的选择。

叶绿素提取方法:称取4g粉碎后的海带于烧杯中,加入30mL有机提取剂,用保鲜膜封口,室温200W超声波提取20min,过滤,收集滤液。移取8mL滤液于分液漏斗中,加入4mL的石油醚和等量饱和氯化钠溶液萃取,加12mL的超纯水洗涤有机相,重复萃取两次,洗去提取溶剂及无机态盐类,合并石 油醚相。于石油醚相中加入0.9mol/L盐酸15mL反萃取15min,分取水相,用超纯水定容于50mL容量瓶中,用原子吸收分光光度计测定此溶液中 镁的质量浓度。测定条件为空气-乙炔火焰,镁波长285.2nm,狭缝宽度0.2nm,灯电流3mA,燃烧器高度5.0mm。原子吸收法测定海带中叶绿素 含量的计算,见式(1)。叶绿素含量/(mg/g)=[C×V1×899.3×V3]/V2×m×24×1000(1)。式中:C为由标准曲线得被测试液 中镁的质量浓度/(μg/mL);m为称样量/g;V1为混合提取液的总体积/mL;V2为移取石油醚相的体积/mL;V3为返萃水相的定容体积 /mL;899.3为叶绿素a、叶绿素b的平均摩尔质量/(g/mol);24为镁的摩尔质量/(g/mol)。

采用超声波提取法对海带中叶绿素进行提取,原子吸收光谱法对提取出的叶绿素中的镁离子进行测定,从而间接得出海带中叶绿素的含量。结果表明,超声波提取叶绿素的最佳工艺条件:以无水乙醇与丙酮体积比1:1的混合液为提取剂,按料液比2:15(g/mL),在室温下超声波选择200W的功率提取2次,每次20min。反萃取的最佳测定工艺条件:用浓度为0.9mol/L的盐酸15mL进行反萃取15min。原子吸收法测定检出限为0.008μg /mL,海带中叶绿素的含量5.486mg/g,相对标准偏差0.675%,回收率97.7%。此方法表明:原子吸收光谱法受干扰程度小,且精密度、灵敏度和准确度较高。


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