氮测定法—亚硝酸钠法

一、重氮化法

（一）定义

以亚硝酸钠液为滴定液的容量分析法称为重氮化法（亦亚硝酸钠法）。

（二）原理

芳香伯胺类药物，在盐酸存在下，能定量地与亚硝酸钠产生重氮化反应。依此，用已知浓度的亚硝酸钠滴定液滴定（用永停法指示终点），根据消耗的亚硝酸钠滴定液的浓度和毫升数，可计算出芳伯胺类药物的含量。

    反应式：  ArNH₂＋NaNO₂＋2HCl→[Ar-N⁺≡N]Cl^-＋NaCl＋2H₂O

（三）滴定条件

1.酸的种类及浓度

（1）重氮化反应的速度与酸的种类有关，在HBr中比在HCl中为快，在HNO₃或H₂SO₄中则较慢，但因HBr的价格较昂，故仍以HCl最为常用。此外，芳香伯胺类盐酸盐的溶解度也较大。

（2）重氮化反应的速度与酸的浓度有关，一般常在1～2mol/L酸度下滴定，这是因为酸度高时反应速度快，容易进行完全，且可增加重氮盐的稳定性。如果酸度不足，则已生成的重氮盐能与尚未反应的芳伯胺偶合，生成重氮氨基化合物，使测定结果偏低。

    [Ar-N⁺≡N]Cl^-＋ArNH₂→Ar-N=N-NH-Ar＋HCl

当然，酸的浓度也不可过高，否则将阻碍芳伯胺的游离，反而影响重氮化反应的速度。

2.反应温度

重氮化反应的速度随温度的升高而加快，但生成的重氮盐也能随温度的升高而加速分解。

    [Ar-N⁺≡N]Cl^-＋H₂O→Ar-OH＋N₂↑＋HCl

另外，温度高时HNO₂易分解逸失，导致测定结果偏高。实践证明，温度在15℃以下，虽然反应速度稍慢，但测定结果却较准确。如果采用“快速滴定”法，则在30℃以下均能得到满意结果。

3.滴定速度

快速滴定法：

将滴定管的尖端插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至永停仪的电流计指针突然偏转，并持续1分钟不再回复，即为滴定终点。

4.苯环上取代基团的影响

苯胺环上，特别是在对位上，有其它取代基团存在时，能影响重氮化反应的速度。

（1）亲电子基团，如-NO₂、-SO₃H、-COOH、-X等，使反应加速。

（2）斥电子基团，如-CH₃、-OH、-OR等，使反应减慢。

（3）对于慢的重氮化反应常加入适量KBr加以催化。

二、亚硝基化反应

芳仲胺类化合物，也可用NaNO₂滴定液滴定，但所起反应并不是重氮化，而是亚硝基化，

                     NO

                     ∣

    ArNHR＋NO₂^-＋H⁺→ArN-R＋H₂O

反应量的关系仍然是1：1。习惯上把这种测定方法叫做亚硝基化滴定，以别于重氮化滴定。两种方法统名为亚硝酸钠法。

三、指示终点方法

（一）指示剂法

1.外指示剂

2.内指示剂

（二）永停法

四、滴定液的配制与标定

亚硝酸钠滴定液

1.配制  间接法配制

2.标定  用基准对氨基苯磺酸标定，以永停法指示终点。

3.贮藏  置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭保存。

五、注意事项

1.将滴定管尖端插入液面2/3处进行滴定，是一种快速滴定法。

2.重氮化温度应在15～30℃，以防重氮盐分解和亚硝酸逸出。

3.重氮化反应须以盐酸为介质，因在盐酸中反应速度快，且芳伯胺的盐酸盐溶解度大。在酸度为1～2mol/L下滴定为宜。

4.近终点时，芳伯胺浓度较稀，反应速度减慢，应缓缓滴定，并不断搅拌。

5.永停仪铂电极易钝化，应常用浓硝酸（加1～2滴三氯化铁试液）温热活化。

6.亚硝酸钠滴定液应于玻塞棕色玻璃瓶中避光保存。

六、适用范围

1.芳香族第一胺类药物。

2.水解后具有芳香第一胺结构的药物。

3.还原后具有芳香第一胺结构的药物。

七本法的相对偏差不得超过0.3%。