不同凝血分析系统检测结果的临床可接受性评估

邓兰平，陈 锋，左和宁

 摘要： 探讨不同凝血分析仪对PT、APTT和Fib检测结果的可比性与临床可接受性评估，为凝血因子测定的标准化和临床实验室认可提供实验依据：  方法参考NCCLS文件，以法国Dgnostica Stago公司生产的STAGO - Compact全自动血凝分析仪及其原装配套试剂和质控品组成的检测系统为比较系统(Y)，其他检测系统(Sysmex CA7000/CA1500)为实验系统(x)，检测病人新鲜血浆中PT、INR、APTT、Fib，用配对t检验和同归统计法分析实验系统和比较系统测定结果均值处的相对偏差或医学决定水平处的系统误差，以美国临床实验室修正法规(CLIA'88)规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准，判断不同检测系统的临床可接受性能。  结果  PT、INR、APTT各检测系统间相关系数均小于0.975，Fib的相关系数大于0.975，实验系统和比较系统测定结果均值处的相对偏差均在临床可接受范围内；除PT的检测系统Y2和Fib的检测系统Y2外，医学决定水平处的系统误差临床均可接受。  结论各系统检测的结果具有较好的可比性，可以同时应用于临床。
    关键词：  PT；APTT；FIB；方法比对；偏差评估
    随着检验技术的不断发展，检验设备日异更新，血凝分析仪已普及各大、中、小型医院，凝血实验在临床上的作用也日趋重要。本文参考NCCLS文件，用不同血凝分析系统分别测定PT、APTT和Fib，并对其结果进行方法比对和偏差评估，判断其临床可接受性，为实现不同检测系统间检验结果的可比性提供依据。
1、材料与方法
1.1检测系统  检测系统l(Y．)：日本Sysmex公司生产的CA-1500全自动血凝分析仪。检测系统2(Y：)：日本Sysmex公司生产的CA-7000全自动血凝分析仪。系统1、2试剂均为美国Dade Behring公司提供，质控品l批号：548124A；质控品2批号：538282A。检测系统3(X)：法国Dgnostica Stago公司生产的STA -R全自动血凝分析仪，配套原装试剂、质控品N批号：060623；质控品P批号：060623。
1.2样本制备  随机采取50例术前未用病人（男：28例，年龄12-68岁；女：22例，年龄16 - 54岁）静脉血1.-8 ml．用109 mmol/L枸橼酸钠按1:9抗凝。采集的血标本立即4 000 r/min离心10 mln，及时分离血浆并于4h内完成测试。
1.3方法  用检测系统3作为比较方法(X)，检测系统3参加了卫生部临床检验中心与湖南省临床检验中心室间质量评价，成绩合格，且已通过标准实验室认可，其余各检测系统为实验方法(Y)，进行方法间的比对试验。实验前对仪器进行常规维护与保养，按常规方法进行室内质控，室内质控在控时方进行样本测定。每个项目的检测严格按照标准操作规程( SOP)规定的操作方法进行。

1.4数据收集与处理  按EP9-A文件进行方法间离群值检查。
1.5统计学方法不同项目实验方法和比较方法间的偏差评估均采用配对t检验，直线相关与回归分析。所有数据用Med -Calc9.0.0.0软件包统计分析。
1.6  临床可按受性能评价  以CLIA' 88对室间评估的允许误差标准为判断依据，方法学比较评估的偏倚值( SE%)≤1/2CLIA' 88值属临床可接受水平，即不同检测系统间的测定结果具有可比性。
2、结果
2.1  实验系统和比较系统测定结果的配对t检验，均是P<0. 001，见表l。

实验系统和比较系统测定结果杲均值处的相对偏差均在1／2 CLIA'88允许范围内，见表2。

2.3  不同检测系统PT、INR、APTT、Fib测定结果的相关与回归分析结果  各实验系统与比较系统均呈正相关(7>0.84)；实验系统Y，与实验系统Y：呈正相关(7>0.92)。PT、INR、APTT实验系统和比较系统间的相关系数均小于0.975，回归统计的斜率和截距不可靠；Fib实验系统和比较系统间的相关系数大于0. 975，可用回归统计的方法计算系统误差。

2.4不同检测系统的可接受性评价  见表4。

3、讨论
       凝血酶原时间( PT)、凝血酶原时间国际标准化比值(INR)、活、化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(Fib)的检测对人体凝血系统分析及临床止血、凝血障碍性疾病的诊断、治疗和检测等具有重要意义‘5]。PT试验不仅反映凝血酶原水平，也反映因子V、Ⅶ、X和纤维蛋白原在血浆中的水平，是外源性凝血系统的筛选试验，常用于口服抗凝剂监测。APTT是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验，常用于诊断轻型血友病。Fib是一种糖蛋白，最重要的生物学功能是能形成血块阻止损伤后血液流失，也是共同途径中一项关键凝血蛋白，尤其常用于弥散性血管内凝血( DIC)的抢救和治疗。
       STAG - Compact全自动血凝分析仪的工作原理采用的是磁珠法，利用磁感应原理检测，即在待测样本中加入1个小铁珠，测试槽两侧独立的线圈交替产生电磁场，使槽内小铁珠在恒定的血浆黏度中保持恒定的摆幅运动。采用电磁式传感器，测定小铁珠的不同振荡幅度，根据检测项日不同，仪器可产生不同的磁场强度，由于是感测磁珠的相对运动，所以不受原血浆黏度的影响，当血浆凝固时，其黏度增加，磁珠摆度减少至原振幅的50%时，计算机系统根据磁珠振幅可精确测试血浆凝固时间。故用磁珠法检测PT、APTT和Fib，不受血浆色泽及混浊物的影响，具有很强的抗干扰性，其作正常参考值可信度较高。 

        CA-1500和CA-7000全自动血凝分析仪均采用散射光比浊法，检测的是散射光时间变化率。凝集前散射光强度为0，完全凝集散射光强度最大为100%，把散射光强度为50%时定为凝固终点，此时重复性，准确性较高，但易受血浆色泽及混浊物的影响。
        本文对不同检测系统PT、INR、APTT、Fib测定进行方法比对和偏差评估。其中配对t检验结果显示在实验系统(Y)和比较系统(X)间均有显著性差异(P<O.O01)。PT、APTT和Fib均值处的相对偏差均低于1/2CLIA' 88允许误差，即配对t检验有显著性差异，但仍处于临床可接受水平。表明实验数据支持存在系统误差，t检验不能作为临床可接受性的判断标准。相关和回归分析结果显示，Fib的实验系统(Y)和比较系统(X)间相关性非常好，相关系数分别为0. 9968、0.9937。PT和APTT实验系统(Y)和比较系统(X)间的相关系数均小于0.975，相关性欠佳。实验系统(Y．)和实验系统(Y2)间的相关系数值均大于实验系统(Y)和比较系统(X)间的相关系数值。由此得出，系统CA - 1500和CA - 7000间相关性较一致，而两者分别与STA -R比较，其相关性不够理想。用回归方程分析实验方法(Y)和比较方法(X)间的系统误差可知：除PT的检测系统2和Fib的检测系统1外，医学决定水平处的系统误差临床均可接受。

       综上所述，以美国临床实验室修正法规(CLIA' 88)规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准，系统CA - 1500/CA 7000与STAGO-Compact测定结果均值处的相对偏差或医学决定水平处的系统误差均处于临床可接受水平。