1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。

2． 取出膜，置于滤纸上干燥。

3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。

4． 移去Buffer A，用新鲜的Buffer A 洗一次，将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血清中，1-2 h，于混匀器上轻轻震荡混匀。

5． 移去血清，用PBS 洗膜，4 次，每次5 min。

6． 洗脱抗体

新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗体洗脱液，将膜置于洗液中，手轻摇混匀2 min，迅速将洗液转移至装有100 μl 1 M Tris（pH 8.0）中和，使抗体复性。第1 次洗脱用400 μl 抗体洗脱液，第2，3 次用200 μl。

7． 往洗脱下来的液体中加入100 μl Buffer A 以稳定抗体，并分装成30 μl 每管，于-20℃保存。

注：所有步骤均在室温完成。

Buffer A：5% BSA，10 mM Tris，0.15 M NaCl，0.2% NP-40，pH 7.4。