本文介绍几种常见的微生物基础试验的目的、原理、内容等,以便刚刚接触微生物的同志们对试验有个基本的认识.
实验一 常用培养基的制备、灭菌与消毒
一、实验目的
1、掌握配制培养基的一般方法和步骤;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法;
2、了解培养基的配制原理;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法.
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物.培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水.根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法.
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用.
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果.
三、试剂与器材
1、器材 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等.
2、试剂 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂
四、实验内容
1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查
2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温摇床→降温→开箱取物
3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查
4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌
五、关键步骤及注意事项
1、要严格按配方配制.
2、调pH不要过头.
3、干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物.
4、高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物.
5、过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存.
六、思考题
1、培养基配好后,为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？
2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么？
3、培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么？
4、培养基的配制原则是什么？
实验二 土壤中微生物分离纯化培养
一、实验目的
1、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术;掌握微生物培养方法;
2、了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征;进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术.
二、实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化.
常用的分离、纯化方法:单细胞挑取法,稀释涂布平板法,稀释混合平板法,平板划线法.
稀释涂布平板法步骤:倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落.
平板划线法步骤:倒平板－标记培养基名称－划线.
三、试剂与器材
1、器材 盛9ml无菌水的试管、盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等.
2、试剂 牛肉膏蛋白胨培养基,高氏1号培养基,查氏培养基
四、实验内容
1、土壤稀释液的制备
2、微生物分离纯化:稀释涂平板法,平皿划线分离法,微生物培养技术
五、关键步骤及注意事项
1、掌握含菌培养基的配制,严格控制温度.
2、平板划线应防止染菌,同时应注意划线深度及密度.
六、思考题
1、如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤.
2、如果要分离得到极端嗜盐细菌,在什么地方取样品为宜？并说明理由.
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