用X-gal和IPTG筛选细菌菌落（α互补）

重组质粒转化的 E.coli

IPTG 溶液 X-gal 溶液

LB 或 YT 琼脂板 LB 或 YT 顶层琼脂 恒温块 木制牙签或接种环

一、材料

1. 缓冲液和溶剂

IPTG 溶液（20%，m/V）

X-gal 溶液（2%，m/V )



2. 培养基

含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板

LB 或 YT 顶层琼脂

3. 专用设备

可调至 45℃ 的恒温块

木制牙签或接种环

4. 载体和菌种

重组质粒转化的 E.coli。

二、方法

1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管，将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。

90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂；150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。

2. 从加热块取出第一支试管，快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板）或 10000 ( 150 mm 培养板）的细菌悬液 0.1 ml。盖紧试管盖颠倒数次，以使细菌在琼脂中混匀。

3. 打开试管盖，按表所示加入适量 X-gal 和 IPTG ( 如果需要）。盖紧管盖缓慢颠倒数次混匀内容物。



4. 快速将溶化顶层琼脂倾入含有适当抗菌素的凝固琼脂板的中部，旋转培养板使琼脂散匀。

5. 重复步骤 2~3，完成所有样品的铺板。

6. 于室温使琼脂凝固，擦净培养板盖上的冷凝水，颠倒培养板于 37℃ 培养12~16 h。

7. 取出培养板于 4℃ 放置数小时使菌落显色。

8. 鉴定携带重组质粒的克隆。

携带野生型质粒的克隆含有 β-半乳糖苷酶活性，菌落的中央呈淡蓝色，外周呈深蓝色。

携带重组质粒的克隆无 β-半乳糖苷酶活性，菌落呈奶白色或蛋壳蓝，有时会在菌落中央出现假性蓝斑。

以鲜黄色为背景观察琼腊板可增强眼的辨别蓝色和白色菌落的能力。

9. 筛选和培养携带重组质粒的克隆。

软琼脂中蓝色或白色克隆可在不同方向上形成，时常看起来像是遥远而倾斜的星空，不管其方向性，这些克隆很容易用接种环或牙签通过穿剌琼脂浅层而被挑选出来，并转移至含有适当抗菌素的培养基中。