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非洲猪瘟检测仪的性能及操作使用

2019.9.10
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

非洲猪瘟病小是一种独特的双链DNA病毒,既能感染野生猪,也能感染家猪。如果爆发,将会导致近100%受感染猪的死亡。因此,尽早发现病原体,并采取相应措施控制其蔓延是目前有效的解决方案之一。

针对这一需求,非洲猪瘟检测仪能对目的基因进行现场快速检测,应用于致病微生物检测、动物疫病诊断、动物源性成分分析(肉类掺假)、转基因检测、药物研究等领域。

该仪器采用便携设计,体积轻巧;45分钟内完成检测,准确快捷;检测数据自动保存和数据导出到U盘;安卓操作系统,界面直观,操作简单;可同步检测DNA、RNA混合样本的检测;一次可检测14个样品,适用多项目同时检测;可靠的光学技术,避免边缘效应,无需ROX校正等繁琐操作;多区控温技术,控温精度和均匀性良好,获得可靠的实验结果;实时监控,自动阴阳性结果判断,自动建立标准曲线,相对、绝对定量、多重定量,熔解曲线等。

非洲猪瘟检测仪操作步骤:

1、病毒DNA的提取(使用A盒)

(1)待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示,取n个灭菌的1.5 mL离心管,逐管编号。

(2)每管加入BufferA500mL。

(3)每管分别加入已处理的待检样品、阳性对照、阴性对照各200mL,充分混匀,室温放置10分钟。

(4)取与上述离心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管,编号。将离心管中的溶液转移至DNase-Free吸附柱,(为避免堵塞吸附柱,尽量不要吸悬浮杂质)。

(5)用高速离心机设置13000 r/min室温离心30秒。

(6)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。

(7)吸附柱内加入600 μL Buffer B,13000 r/min离心30秒。

(8)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。

(9)重复步骤(7),(8)。

(10)13000 r/min空柱离心2分钟,去除残留液。

(11)将每个吸附柱分别移入新的1.5mL离心管中,向柱中央加入50μL Buffer C,室温静置1分钟,13000 r/min离心30秒,离心管中液体即为模板DNA。获得的DNA溶液,冰上保存备用(注意提取的DNA须在2h内进行PCR扩增,若需长期保存须放置-80℃冰箱,但应避免反复冻融)。

2、荧光PCR扩增(使用B盒)

(1)从试剂盒中取出荧光PCR反应液、Taq酶,室温融化后,2 000 r/min离心5秒。设所需PCR管数为n(n = 样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系需要20 μL 荧光PCR反应液和0.5 μL Taq酶。计算好各试剂的使用量,加入一适当体积小管中,充分混合均匀后,向每个PCR管中各分装20μL。

(2)分别向上述PCR管中加入(11)中制备的DNA溶液各5μL,盖紧管盖,500 r/min 离心30秒。

(3)将加样后的PCR管放入荧光PCR检测仪内,作好标记。反应参数设置:

第一阶段,预变性95℃/3分钟

第二阶段,95℃/15秒,52℃/10秒,60℃/35秒共45个循环。荧光收集在第二阶段每次循环的60℃延伸时进行。


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