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用农药检测仪器测定小分子的农兽药残留

2019.9.11
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

我们知道尽管早期的农药检测仪器由于特异性不够高而妨碍了其在实际中应用的步伐,但随着方法的不断改进、材料的不断更新,检测的效果越来越好,酶进行高效催化作用,逐渐具有检测灵敏度高、特异性强、准确性较好等特点,而且可与其他技术偶联而衍生出适用范围更广的新方法。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法,如竞争法、间接法、双抗体夹心法、双位点一步法等。目前用于农兽药残留检测试剂盒的ELISA方法主要为竞争法和间接法。此方法仪器化程度低、操作简便,特别是对样本前处理要求简单,易于推广,所以此方法成为优先发展的分析技术之一。


农药检测仪器基本原理:就是利用ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表而的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。


抗原抗体反应指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应,抗体能特异性地识别相应的抗原,并与之结合。这种反应即可在机体内进行,也可以在机体外进行,这种特性就是许多免疫检测方法的基础。抗原的特异性取决于抗原决定簇的数目、性质和空间构型,而抗体的特异性则取决于抗体时间段的可变区与相应抗原决定簇的结合能力。因为抗体分子的结构特点,以及抗原分子结构的多样性,使抗原抗体结合反应表现出复杂性。抗原抗体反应的过程是经过一系列的化学和物理变化,包括抗原抗体特异性结合和非特异性促凝聚两个阶段,及由亲水胶体转为疏水胶体的变化。抗原抗体反应的特点主要有三性:即特异性、比例性、可逆性。抗原与抗体不是通过共价键,而是通过很弱的短矩引力而结合,如范德华引力、静电引力、氢键及疏水性作用等。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:固相的抗菌素原或抗体,即“免疫吸附剂”(如图5-1

七种磺胺类药物的ELISA标准曲线

C2)酶标记的抗原或抗体,称为结合物;酶反应的底物。测小分子的农兽药残留,一般用以下几种方法:


间接竞争法:用抗原包被固相载体后,同时加入特异性抗体和待测物,使固相抗与样品中的待测物竞争性地结合抗体,去除固相和液相后加入酶标二抗,最后加入酶反应底物,根据其显色程度判定其样品中的待测物含量。


直接竞争法:将特异性抗体包被固相载体,待测药物与己知量的酶标抗原混合后加入。待测药物和酶标抗原,具有相同抗原决定簇,它们竞争性地结合固相抗体。分离游离的和结合的酶标抗原,最后加入酶反应底物,根据显色程度判定待测药物的含量。


间接夹心法:将样品中的抗原结合于过量的固相抗体,温育洗涤加入过量的同种抗体(第一抗体),再温育洗涤后加入酶标二抗,最后加入底物反应,据显色程度确定待测抗原的含量。


双抗体夹心法:抗体包被固相载体,加入待测抗原使其与过量的固相抗体结合,温育洗涤后再加入过量的酶标抗体,分离固相和游离相的化合物,加入反应底物,据显色程度来判定样品中抗原的含量。


目前广泛使用的各种农兽药残留实验室酶联免疫快速检测技术和快速检测试剂盒基本上都是定量检测,而试纸条技术属于定性检测技术。试纸条与试剂盒相比较具有更加易于携带、检测更加迅速等优势。在实际检测过程中,特别是现场快速检测,并不一定需要对每个样品都获得定量数据而只需要定性地判别出某个样品是否含有某种农兽药,含量是否超过规定标准既可。因此只需要几分钟或十几分钟就可以获得结果的农药检测仪器是最为合适的检测工具。


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