实验方法原理 | T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的交换反应(Van de Sande et al. 1973; Berkner and Folk 1977) 是一个标记 5' 端 DNA 的快速方法。与正向反应不同的是,它无需 DNA 去磷酸化。正向反应在略偏酸性(pH 6.4)的咪唑缓冲液中进行,以刺激酶促去磷酸化 (Berkner and Folk 1977)。交换反应的最佳 Km 值(ADP 为 300 μmol/L,ATP 为 10 μmol/L),均比在试验管中容易达到的值高,因此标记效率很少超过 30%。然而,交换反应效率通过在反应混合物中加入亚精胺和聚乙二醇大为改善(Lillehauget al. 1976; Harrison and Zimmol/Lmerman 1986a)。 |
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实验材料 | T4 噬菌体多核苷酸激酶 DNA |
试剂、试剂盒 | ADP 乙酸铵 ATP EDTA 乙醇 咪唑缓冲液 聚乙二醇 |
仪器、耗材 | 液体闪烁计数仪 Sephadex G-50 离心柱 Sephadex G-50 柱 |
实验步骤 |
一、材料 展开 |