实验步骤 |
(一)材料与设备
1) 水平电泳装置。
2) 水浴
3)4X 甲基汞凝胶电泳缓冲液:200 mmol/L 硼酸,20 mmool/LN2B4O7.H2O,40 mmol/LNa2S04(pH8.0)
4)2X 凝胶加样缓冲液:
lmol/L 氢氧化甲基汞 25u1
4X 甲基汞凝胶电泳缓冲液 500ul
甘油 200ul
溴酚蓝 2ug
5)0.5ug/ml 溴化乙锭
6)0.lmol/L 乙酸铵溶液
(二)操作方法
1) 制备凝胶:大于或等于 1kb 的 RNA 用 1% 琼脂糖,小于 1kb 的 RNA 用 1.4% 琼脂糖. 将琼脂糖溶于 1X 甲基汞凝胶屯泳缓冲液,冷却至 55°C 后,加氢, 氧化甲基汞至终浓度为 5 mmol/L,随后灌胶。
2) 电泳:将等体积的 2X 凝胶加样缓冲液与 RNA 溶液混勻,点样,电泳。
3) 结果观察:电泳结束后,用含 0.4 g/ml 溴化乙锭的 0.lmol/L 乙酸铵溶液浸泡凝胶即 30〜45 min,进行 RNA 染色,在紫外灯下观察。铵离子使甲基汞转化为带电的非挥发性复合物,并促使溴化乙锭与 RNA 的结合。
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