基本方案
实验方法原理 | |
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实验材料 | 半胱胺 |
试剂、试剂盒 | 过氧化物酶 SMCC-溶液 |
仪器、耗材 | 交联葡聚糖 G-25 色谱柱 分光光度计 |
实验步骤 |
实验所需「试剂」具体见「其他」 将 10 mg 过氧化物酶溶解到 1 ml 0.1 mol/L pH 7.0 放入磷酸二氢钾中,加热至 30℃,并加入 60 ul SMCC 溶液(终浓度 15 mmol/L),缓慢搅拌 1 h。离心分离沉淀,将上清过柱(交联葡萄糖 G-25),并用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾洗脱。用超滤器将含有过氧化物酶的组分(先洗脱,而后测定酶活或测定 280 nm下吸收值)浓缩至 10 ml,然后加入约 10 mg 硫醇抗体,反应产物可通过凝胶过滤进一步纯化。
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注意事项 | |
其他 |
试剂: 过氧化物酶(辣根) SMCC-溶液(4-{N-马来酰胺甲基}环己烷-1羧酸-N-羟丁二酰亚胺酯,Mr=334.3;溶解 5 mg 于 60 ul N,N'-二甲基甲酰胺,30℃) 交联葡聚糖 G-25 色谱柱,约 1.5 cm×30 cm,用 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸二氢钾平衡 0.1 mol/L 半胱胺(Mr=77.2;77.2 mg 溶于 10 ml 水中)
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