1. 将质粒 pBR322 与一碱性球状蛋白溶液(一般为细胞色素 c)混合。使浓度分别达到 0.5~2 mg/ml 和 0.1 mg/ml,并加入终浓度为 0.5~1 mol/L 的醋酸铁和 1 mmol/L 的乙二胺四乙酸二钠,成为展开溶液, pH 为 7.5。
2. 在一干净的平皿中注入一定下相溶液(蒸馏水或 0.1~0.5mol/L 的醋酸铁溶液),并在液面上加入少量滑石粉。将一干净载玻片斜放于平皿中,用微量注射器或移液枪吸取 50 μl 的展开溶液,在离下相溶液表面约 1 cm 左右的载玻片上前后摆动,滴于载玻片的表面,此时可看到滑石粉层后退,说明蛋白质单分子膜逐渐形成,整个过程约需 2~3 min。
3. 单分子膜形成后,用电镜银子取一覆有支持膜的载网,使支持膜朝下,放置于离单分子膜前沿 1 cm 或距离载玻片 0.5 cm 的膜表面上,并用镊子即刻捞起。单分子膜即吸附于支持膜上,多余的液体可用小片滤纸吸去,也可将载网直接漂浮于无水乙醇中 10~30 s。
4. 将载有单分子膜的载网置于 10-3~10-5mol/L 的醋酸铀乙醇溶液中染色约 30 s(此步可在用乙醇脱水时同时进行),或用旋转投影的方法将金属喷镀于核酸样品的表面。也可将二种方法结合起来,在染色后再进行投影,其效果有时比单独使用一种方法更好一些。 展开 |