表皮细胞培养实验
乳腺组织培养实验
胃上皮细胞培养实验
肝细胞培养实验
内皮细胞培养实验
毛细血管内皮细胞培养实验
实验方法原理 | 利于皮肤表皮细胞培养成功的因素有,在有胶原的底物上易生长;另有人发现把人或小鼠表皮细胞培养在以3T3 细胞为饲养层(用射线照射后)上时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低pH、Ca2+的含量和温度等,均利于表皮细胞生长。向培养基中加氢化可的松( 10 μg/ml )、10-10 的霍乱毒素、10M-6 的异丙基肾上腺素(Isopro-terenol)和10 ng/mI 促表皮生长因子(EGF)能促表皮细胞生长。 |
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实验材料 | 皮肤 血清 |
试剂、试剂盒 | EDTA 胰蛋白酶 Eagle |
仪器、耗材 | 血管钳 吸管 CO2温箱 |
实验步骤 |
皮肤是皮表细胞培养来源,小儿包皮是皮肤表皮细胞培养的好材料。全皮培养时,表皮细胞与成纤维细胞混合生长,难以纯化。黑木登志夫(1981)用皮肤表皮和真皮分离培养法可获纯上皮细胞,有一定参考价值,其法如下:
1. 取材
展开 |
注意事项 |
冷消化目的在于使表皮和真皮结合松散,如冷消化后分离下来的表皮膜自身也已松散,此时亦可直接置入PBS中用吸管吹打制备细胞悬液;不再经过第二次消化。
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其他 |
皮肤表皮培养亦可用全皮消化法或组织块培养法培养。用胶原酶消化为好,它对结缔组织有较强消化作用,对表皮细胞损伤小,但成纤维细胞易与上皮细胞同时生长,在这种情况下,需做排除成纤维胞处理。血清中含有血小板来源的生长因子(PDGF),易促成纤维细胞的生长;如用好的、不含PDGF的无血清培养基培养可能更好。
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