CB-MNCs

灭菌培养基 过柱缓冲液 FcR阻断剂 CD34微球

柱子（MS+ RS+或LS+ VS+) 磁珠细胞分离仪 尼龙过滤网 30μm

(a)准备过柱缓冲液，用抽真空装置去除气体。

(b)每10⁸个CB-MNCs用终体积300μL缓冲液重悬。

(c)每10⁸个CB-MNCs悬液加100μL FcR阻断剂，抑制CD34微珠非特异性结合或通过Fc受体介导与非靶细胞的结合。

(d)每10⁸个CB-MNCs悬液加100μL CD34微球进行细胞标记，充分混匀后在6〜12℃冰箱放置30min。

(e)加PBSA洗，室温200g离心10min;加适量的缓冲液重选细胞。

(f)根据CB-MNCs的细胞总数选择合适的柱子类型（MS⁺/RS⁺或LS⁺/VS⁺)，将柱子放人MACs分离仪的磁场中。加人缓冲液润洗柱子（MS⁺/RS⁺:50μL;LS⁺/VS：3mL)。

(g)用30μm的尼龙过滤网过滤细胞，去除细胞团。使用前，用缓冲液湿润柱子。

(h)将细胞悬液加人柱子，使未结合的细胞通过柱子。

(i)用缓冲液将未结合的细胞洗去（MS⁺/RS⁺:3×500μL;LS⁺/VS:3×3mL)。

(j)洗脱结合的细胞。将柱子从分离仪中移出。置于合适的管中。将柱子加满缓冲液（MS⁺/RS⁺:1mL;LS⁺/VS: 5mL)。用柱子随带的内塞，加压将结合的细胞冲洗出来。

(k)加PBSA将CD34+细胞洗一遍，室温200g离心l0min。用适当的培养基重悬细胞。