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纳米纤维固相萃取柱萃取高效液相荧光法分析头发皮质醇

2019.10.26
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韩金龙

致力于为分析测试行业奉献终身

摘要采用基于纳米纤维固相萃取的高效液相色谱-荧光测定( HPLC-Flu) 法测定头发中的皮质醇水平。以新型纳米纤维萃取柱( PFSPE) 提取头发样本浸出液,用100 !L 乙醇洗脱,再加入230 !L 浓H2 SO4反应2 min,反应物加水混合后用PFSPE 柱提取,最后用50 !L 甲醇直接洗脱后注入色谱体系进行分析。此方法的检出限为0. 05 ng /g( S /N = 3) ,日内精密度和日间精密度分别低于6. 8% 和8. 9%,平均方法回收率为88.9%。本方法提取过程简便、快速、环保,而且可以准确测定头发样本中的皮质醇水平。

    在精神生物学研究中,皮质醇( 啮齿类动物是皮质酮) 是一种非常重要的激素,它被称为“压力荷尔蒙”,人体面临生理、心理刺激时,其分泌量增高( 应激反应) [1]。目前研究中采用的血液、唾液、尿液等样本测试皮质醇的水平,只能反映应激及时变化或一定时间内的累积情况。而对于研究对象一段时间( 数月以上) 的应激情况进行了解,就可以采用头发这种生物样本。研究证实,头发能够反映人体长期的摄药信息( 可以追溯到几个月之前) ,头发皮质醇是一种很好的研究长期下丘脑-垂体-肾上腺轴( HPA 轴)活性的工具,可以客观测量慢性应激[2]。Pereg 等[3]指出,在诸多心梗发病征兆中,头发的皮质醇水平是判断发病风险最明显的生物学标志物。采用头发基质,对于分析测试具有很多优势,如头发生长规律,为研究者提供一种追溯性研究窗口; 头发采样无创、简便、无需专业指导; 头发样本可以室温储存等[2]。头发皮质醇分析将成为生理学、精神医学、体育医学、认知科学、心理学等众多学科的重要研究手段。
    目前,头发中皮质醇测定多采用放射免疫法[4]、酶联免疫法[5]及LC-MS 法[6]。免疫法灵敏度较高,能够检测出头发中的痕量皮质醇,但存在交叉反应、测定结果偏高。各种商业性的免疫试剂盒测定的结果差异性较高,试剂盒的成本也较昂贵。LC-MS 法虽然准确灵敏,但需要昂贵的仪器,故一般实验室难以普及。此外,还有HPLC-Flu 法测定头发中皮质醇分布的报道[7],采用传统SPE 和溶剂萃取的方法分别提取头发浸出液和硫酸衍生产物。本研究优化改进了头发样本前处理操作,用本研究组建立的基于电纺纳米纤维的固相萃取技术( Packed-fiber solid-phase extraction,PFSPE) [8,9]取代文献方法SPE 和溶剂萃取步骤,省略了挥发提取溶剂浓缩目标物的操作,使热不稳定的目标物提取效率大大提高,同时使前处理操作时间大大缩短、操作更为简便,实现了头发中皮质醇的高效灵敏检测。


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