液相色谱仪(HPLC)现已成为有机化学分析的重要手段之一。和其它分析仪器一样，想要HPLC很好地为你工作、得到可靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。笔者将从液相色谱仪使用中的几个注意事项进行讨论，给新从事HPLC分析的工作者一点操作建议，希望能对大家进行正确的操作仪器起到帮助。
基本操作
1). 严格过滤色谱纯流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气20～30分钟。
3). 打开色谱工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。
4).有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，冲洗时速度不要超过10ml/min。
5). 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000psi。选用合适的流速。
6). 设定不同样品的检测器分析参数。
7). 等基线走稳即可进样分析，分析样品时对样品的前处理非常重要。
8).关机时，先关检测器，泵不要关掉，应改用流动相冲洗泵，不同的流动相冲洗时间不同，一般冲洗30min，若是缓冲盐作流动相应先用水冲洗30min，再用纯甲醇冲洗。
9). 然后关液相泵。
10). 需要把进样阀冲洗干净，另把注射器等工具清理整洁。
注意事项
一、加装保护柱
保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器,但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污然,因此,加装保护柱是必要的,特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱必不可少的措施。
二、过滤流动相和样品
流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
三、净化样品
当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生*性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
四、避免过高的柱压
虽然液相色谱柱能耐受的压力可达6000 p si (磅/平方英寸) ,但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命,避免的方法是
(1)柱压过高时,尽可能采用较小的流速,以不超过柱zui大允许压力的一半为宜。
( 2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。
(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时,柱切换要避免在高压下进行。
五、正确及时的冲洗
开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。
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