HPLC由溶剂输送系统（脱气机、高压泵等）、进样系统（定量泵、六通阀、定量环、进样针等）、分离系统（色谱柱等）、检测系统（检测器等）、记录及数据处理系统。
高压输液泵：将流动相在高压下连续不断地送入液路系统，具有有足够的压力，输出流量恒定、可调，输出压力平稳，泵室体积小，泵体抗腐蚀、耐酸等特点。
压力平稳、流速恒定是HPLC系统稳定、重现性良好的前提条件，多数的HPLC故障、色谱数据异常均会表现出压力异常，如偏高、偏低、波动大等，在日常使用中需要特别关注压力变化。
在线脱气机：四元低压系统属于泵前混合，由于在常压下混合，极易产生气泡，必须配有在线脱气机，并要求流动相使用前进行脱气，流动相脱气得目的如下：
使色谱泵输液均匀准确，减小脉动。
提高保留时间和色谱峰面积的重现性。
防止气泡引起尖峰。
使基线稳定，提高信噪比。
降低溶剂的紫外吸收本底。
减少死体积。
防止填料氧化。
进样系统：分为手动进样系统和自动进样系统， 主要由定量环、六通阀、进样针等部件组成。手动进样系统的定量环用于准确定量，分为5μl、10μl、20μl等，需要根据不同进样量选择合适的定量环；自动进样系统仪器自带定量环多为100μl，如进样量大于定量环体积需咨询相应仪器工程师更换定量环及计量泵等，六通阀是最理想的进样部件，由圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）组成，通过阀切换保证恒定的流速
分析液相多数配自动进样系统，自动进样系统具有进样精度高、重现性好、可用于大量样品分析等特点。
分离系统：包括色谱注、柱温箱，连接管线等部件。
色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2～6mm，柱长为10～50cm，柱形多为直形，内部充满3～10 μm高效微粒固定相，根据不同的实验需求需要选择不同填料、不同规格的色谱柱。
柱温箱：保证分离系统的温度恒定，降低温度波动对色谱基线、保留时间及色谱分离的影响，包括普通柱温箱及带有冷却功能的柱温箱，普通柱温箱可以根据方法需求设定高于室温的温度（一般应高于室温5℃以上），降低柱压或是改善色谱分离，带有冷却功能的柱温箱可以升高柱温外,还可以设定低于室温的温度，预防稳定性差样品的降解，各品牌柱温箱的控温范围略有差别，需要通过相应产品说明书或咨询客服了解。
需要特别注意的是有些品牌的柱温箱是没有配置预加热模块的，对于温度敏感的样品需要在柱前连接一段管线，对流动相进行预加热，管线长度及内径需适当，尽量降低死体积。
检测器：包括紫外可见吸收检测器(UVD)、荧光检测器(FD)、蒸发光检测器（ELSD）、示差折光检测器(RID)、电化学检测器(ED)、化学发光检测器(CD)、质谱检测器（MS）等类型，其技术要求为灵敏度高、噪音低、线形范围宽、响应快。
紫外可见吸收检测器(UVD)：波长范围190～800mm，190～400mm为紫外区域，氘灯，400～800mm为可见光区域，钨灯。其特点为灵敏度高，最小检测浓度10-9g/ml，线性范围宽，对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱，应用范围广。适用于带有共轭基团的化合物，为最常用的检测器。
荧光检测器(FD)：氘灯作激发光源，波长范围250～600nm。其特点为灵敏度更高，检测限10-12～10-13g/ml（灵敏度比UV检测器高2～3个数量级），选择性好，对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱，所需试样量少，适于痕量分析，应用于组分吸收一定波长紫外光后发射荧光的物质，且荧光强度与浓度成正比。
蒸发光检测器（ELSD）：是一种通用型的检测器，可检测挥发性低于流动相的任何样品，而不需要样品含有发色基团。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。被广泛应用于碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测。其主要缺点为响应值与浓度不呈线性，需取响应值的对数与浓度计算线性。
示差折光检测器(RID)：是一种连续检测样品流路与参比流路间液体折光指数差值的通用型检测器，其优点为对糖类检测灵敏度较高，其检测限可达10-8g/ml；稳定性好，操作方便，缺点该检测器对多数物质的灵敏度低（约10-5g/ml）,通常不用于痕量分析；受环境温度、流动相组成等波动的影响较大，不适合梯度洗脱。
质谱检测器（MS）:将样品中的分析物电离，不同质量离子在电场或磁场中，将按其质量和所带的电荷比（质荷比，m/z）进行的分离和排序，根据质荷比的大小和相对强度形成规则的质谱，从而对物质进行结构鉴别和定量分析。质谱分析具有灵敏度高，样品用量少，分析速度快，分离和鉴定同时进行等优点，但流动相中不能含有无机盐。
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