ELISA法是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。
由于测定中需要酶标记抗原或抗体,酶分子与抗原或抗体分子的结合物可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。
常用的ELISA分析
1) 测定抗原
A 将抗体吸附于固相表面,这个过程叫包被。
B 加抗原,形成抗原-抗体复合物。
C 加酶标抗体。
D 加酶反应的底物。反应终止时,反应液的颜色深浅与抗原的含量成正比。
主要步骤:
1.包被抗体的酶标板(一抗)。
2.加待测抗原。抗原抗体反应,洗涤。
3.加酶标抗体(二抗)。反应,洗涤。
4.加显色底物(三抗),反应,洗涤。
5.加终止液。
6.酶标仪上读取吸光度值。
7.根据标准曲线对待测抗原进行定量。
(2) 测定抗体
A 抗原包被在酶标板。
B 加抗体,形成抗原抗体复合物。
C 加酶标抗体(一抗)
D 加酶底物(二抗),显色,比色。