方案11.1 玻璃器皿的准备和灭菌
| 实验方法原理 | 检査配方设计：如果配方完全，在加完血清之后可直接使用；如果配方不全（例如，缺少谷氨酰胺），则加人相应的浓缩液。 |
|---|---|
| 实验材料 | 培养基储存液 谷氨酰胺 血清 抗生素 青霉素 链霉素 |
| 试剂、试剂盒 | 吸液管 |
| 实验步骤 | 1. 检查培养基的配方，并决定需要添加何种添加剂，例如谷氨酰胺。 2. 将培养基放在超净台内，如果需要可加入其他补充物或添加剂。 3 . 如果瓶盖用聚乙烯封口，去掉聚乙烯，用 70 % 的乙醇擦洗。 4. 将瓶子打开。 5. 将各种适量的添加剂加到瓶中，并做正确稀释；如果配制 100 ml，按下列配方： 谷氨酰胺，200 mmol/L，1 ml 抗生素（如果需要使用），0.5 ml (每种各取) 血清，10 ml (10%) (a) 每一种添加剂均用不同的移液管。 (b)加完一种添加剂后将其移到超净台的一侧，这样就知道已经加了哪种添加剂。 (c)培养基配完后，将所有的添加剂和补充物从超净台上拿走。 6. 此方案特别针对以 Hank’s 盐溶液配制的 MEM ，这种培养基含低浓度的碳酸氢钠（4 mmol/L )。如果是使用以 Earle’s 盐溶液配制的 MEM 或其他高碳酸盐浓度的培养基（23 mmol/L ) , 配制后要充人 5% 的 CO2 气体。不要向含有血清的培养基中直接充气，因为培养基起泡将从瓶颈处溢出，污染的危险性增大。 7. 将瓶子盖好。 8 . 更改标签，记录添加剂、日期并签名。 9. 将培养基保存在 4°C 或直接使用。 10. 如果是第一次使用一种新的培养基，要吸出一些放在培养瓶或培养皿中，在标准条件下培养至少 1h （最好过夜），确认 pH 处于正确的水平。如果不是，调整培养基 PH ，重复上述过程，或者改变 CO2 的浓度。 |
| 注意事项 | 1. 加入培养基的补充成分（比如， 血清或抗生素）并不包含在最初的配方中。这必须在发表文章时有简要的说明， 其他加入的添加剂（例如， 谷氨酰胺或NaHCO3是配方的一部分， 而不是补充物。它们不需要在发表文章时进行说明， 除非浓度有变化。 2. 改变温箱的 CO2 浓度也会影响温箱中其他的培养基。改变 CO2 的浓度应被视为一次性地调整， 不应该用于调整批间的变化，批间的变化最好通过加无菌的酸或碱来调整。 |
| 其他 | 用10X 浓缩液配制培养基是一种折中的好方法，其经济性和便捷性介于使用以干粉配制培养基和使用1X 工作液 之间。方案11. 8 的设计可与练习10相结合。 |
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