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种子发芽率的快速测定

2019.11.19
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王辉

致力于为分析测试行业奉献终身

种子发芽率是指在最适宜条件下,在规定天数内,发芽的种子占供试种子的百分数。它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据,与播种时的用种量直接有关。但是常规方法(直接发芽)测定发芽率所需时间较长,特别是有时为了应急需要,没有足够的时间来测定发芽率,遇到休眠种子也无法知道。快速测定法则能在较短时间内获得结果。

Ⅰ.氯化三苯四氮唑法( TTC法)

原理

凡有生命活力的种子胚部,在呼吸作用过程中都有氧化还原反应,而无生命省略的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内,并作为氢受体被脱氢辅酶(NADH2 或NADPH2 )上的氢还原时,便由无色的TTC变为红色的三苯基甲(TTF)。

仪器药品

恒温箱    烧杯

培养皿    镊子

刀片     天平

0.5% TTC溶液:称取0.5g TTC放在烧杯中,加入少许95%乙醇使其溶解,然后用蒸馏水稀释至100ml。溶液避光保存,若变红色,即不能再用。

操作步骤

1.浸种

将待测种子在30─35℃温水中浸种(大麦、小麦、籼谷6─8小时,玉米5小时左右,粳谷2小时),以增强种胚的呼吸强度,使显色迅速。

2.显色

取吸胀的种子200粒,有刀片沿种子胚的中心线纵切为二半,将其中的一半置于2只培养皿中,每皿100个半粒,加入适量的0.5% TTC,以覆盖种子为度。然后置于30℃恒温箱中0.5─1小时。观察结果,凡胚被染为红色的是活种子。

将另一半在沸水中煮5分钟杀死胚,作同样染色处理,作为对照观察。

3.计算活种子的百分率,如果可能的话与实际发芽率作一比较,看是否相符?

Ⅱ.溴麝香草酚蓝法( BTB法)

原理

凡活细胞必有呼吸作用,吸收空气中的O2 ,放出CO2 。CO2 溶于

增加,可用溴麝香草酚蓝(BTB)来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0─7.6,酸性呈黄色,碱性呈蓝色,中间经过绿色(变色点为pH7.1)。色泽差异显著,易于观察。

仪器药品

恒温箱    天平

培养皿    烧杯

镊子     漏斗

滤纸     洋菜

0.1%BTB溶液:称取BTB0.1g,溶解于煮沸过的自来水中(配制指示剂的水应为微碱性,使溶液呈蓝色或蓝绿色,蒸馏水为微酸性不宜用),然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色,可加数滴稀氨水,使之变为蓝色或蓝绿色。此液贮于棕色瓶中可长期保存。

1%BTB琼脂凝胶:取0.1%BTB溶液100ml置于烧杯中,将琼脂剪碎后加入,用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后,趁热倒在数个干洁的培养皿中,使成一均匀的薄层,冷却后备用。

操作步骤

1.浸种

同上述TTC法。

2.显色

取吸胀的种子200粒,整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中,种子平放,间隔距离至少1cm。然后将培养皿置于30─35℃下培养2─4小时,在蓝色背景下观察,如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子,否则是死种子。

用沸水杀死的种子作同样处理,进行对比观察。

3.计数种胚附近出现黄色晕圈的活种子数,算出发芽率。

Ⅲ .红墨染色法

原理

凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力,而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力,于是染料便能进入死细胞而染色。

仪器药品

1.浸种

同上述TTC法。

2.染色

取已吸胀的种子200粒,沿胚的中线切为两半,将一半置于培养皿中,加入5%红墨水(以淹没种子为度),染色10梍15分钟(温度高时间可短些)。染色后倒去红墨水,用水冲洗多次,至冲洗液无色为止。检查种子死活,凡种胚不着色或着色很浅的为活种子;凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子作对照观察。

3.计数种胚不着色或着色浅的种子数,算出发芽率。

Ⅳ.纸上荧光法

原理

具有生活力的种子和已经死亡的种子,它们的种皮对物质的透性是不同的,而许多植物的种子中又都含有荧光物质。利用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活,方法简单,特别是对十字花科植物的种子,尤为适用。

仪器药品

紫外荧光灯   培养皿

镊子      滤纸(无荧光)

操作步骤

1.将完整无损的种子(油菜、白菜等十字花科植物的种子100粒,于25─30℃水中浸泡2─3小时。

2.把已吸胀的种子,以3─5mm间隔整齐地排列在培养皿中的湿滤纸上,滤纸上水分不能过多,以免荧光物质流散彼此影响。培养皿可以不必加盖,放置1.5─2小时,取去种子,将滤纸阴干。取出的种子仍按原来顺序排列在另一培养皿中(以备验证)。

3.将阴干的滤纸置于紫外荧光灯下进行观察,观察如能在暗室中进行,则效果更好。

4.在放过种子的位置上如见到荧光圈,则为死种子。如要确证它们是死种子,可将排列在另一培养皿中的这些种子拣出来,集中在一只培养皿的湿滤纸上,而让不产生荧光圈的种子留在培养皿中,维持湿度,让其自然发芽。

5.3─4天后记录培养皿中发芽种子数,填入下表中。

此方法的成败,首先决定于种子中荧光物质的存在,其次决定于种皮的性质。有些种子无论有无发芽能力,一经浸泡,即有荧光物质透出,大豆即属此类;

也有些种子由于种皮的不透性,无论种子死活,都不产生荧光圈,许多植物的种子都会碰到这种个别现象,此时只有用机械方法擦伤种皮,可重行验证。相反,有时由于收获时受潮,种皮已破裂,也会产生荧光圈,试验时都应该注意。最好将浸泡液进行检查,没有荧光则适于作试验材料。


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